细胞免疫学实验.ppt

《细胞免疫学实验.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、免疫学实验微生物学与免疫学教研室内容提要E花环实验淋巴细胞转化实验2大吞噬实验3小吞噬实验4E花环试验人外周血T淋巴细胞上能与绵羊红细胞结合的受体，称为E受体，即CD2分子或LFA-2（淋巴细胞功能相关抗原-2）；在一定的试验条件下，绵羊红细胞能与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花环形成试验。TTBSRBCCD2固定、染色固定：取出孵育后的细胞，滴加0.8%戊二醛200μl（等体积），轻轻悬浮混匀，4℃孵育放置20-30min。涂片：向上述细胞悬液中加50μl美兰染液，混匀，静

2、置5min，取一滴于载玻片上，加盖玻片。镜检镜检：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞）计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其T淋巴细胞百分率。正常值为：50～80%。注意：计数及摇匀细胞时动作应轻柔，避免打散已形成的花环结果E花环分类Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为15~35%。（activatedrosetteformationcells,A-RFC）。E-RFC(总和)：正常值为60~80%。意义：①E-受体为

3、T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一，还用于T细胞的分离。②用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。视频动画内容提要淋巴细胞转化实验2E花环实验1大吞噬实验3小吞噬实验4淋巴细胞转化试验★植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）选择性刺激T细胞增殖；★脂多糖（LPS）、葡萄球菌A蛋白（SPA）可刺激B细胞增殖；T细胞、B细胞表面具有抗原识别受体和有丝分裂原受体美洲商陆淋巴细胞转化试验原理当T淋巴细胞在体外培养时，加入PHA或ConA刺激，T淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，同时伴有D

4、NA、RNA及蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。根据其转化率可测定T淋巴细胞的功能，从而反映机体的细胞免疫功能。DNA合成分化淋巴母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松T淋巴细胞未转化细胞过渡态细胞淋巴母细胞转化淋巴细胞的判断标准细胞类别形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞胞体大小（直径）10～20µm或更大12～16µm6～8µm胞核位置多偏于一侧，少数位于中央中央或稍偏多位于中央染色质疏松，呈粒状较疏松致密团聚核仁清晰，可见1～3个有或无无有丝分裂有时可见无无胞浆量丰

5、富，核之一侧较宽广稍宽较少，常呈一窄环嗜碱性+++++++～++++～+空泡常可见有或无无伪足常可见有或无无内容提要大吞噬实验3淋巴细胞转化实验2E花环实验1小吞噬实验4原理巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力。常用细胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育，检测巨噬细胞的吞噬能力。原理16大吞噬试验鸡红细胞大吞噬细胞对鸡红细胞消化程度分级：Ⅰ级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。Ⅱ级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡。Ⅲ级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。结果计算可观察鸡红细胞的消

6、化程度，以判断巨噬细胞胞内杀伤功能。吞噬百分比＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/所计数的巨噬细胞总数（吞噬的＋未吞噬的）×100%吞噬指数＝100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞临床意义参考值：正常人吞噬百分比为60%～65%，吞噬指数1%左右临床意义：可作为机体抗肿瘤能力的判断指标。恶性肿瘤病人吞噬百分比为34%～38%。吞噬指数为0.6%左右。有人报告，食道癌、胃癌、肠癌、乳腺癌以及其它恶性肿瘤患者的吞噬百分比都在45%以下，吞噬指数也降低。不少患者在术后有不同程度的回升，提示本试验也可作为判断肿瘤

7、疗效及预后的一个参考指标。内容提要3214E花环实验淋巴细胞转化实验大吞噬实验小吞噬实验原理血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞。有强大的吞噬和消化异物的功能，构成机体天然抵抗力。在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。对中性粒细胞的检测包括运动功能、吞噬功能和杀伤功能的测定。对于感染等疾病有重要的辅助诊断意义。结果油镜下见中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色。