离子交换色谱法分离纯化水溶性花菁染料的研究.pdf

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1、第42卷第3期应用化工Vo1．42No．32013年3月AppliedChemicalIndust~Mar．2013离子交换色谱法分离纯化水溶性花菁染料的研究王立兵，秦秋浦，玄光善(青岛科技大学化工学院药学系，山东青岛266042)摘要：针对水溶性不对称荧光染料及副产物不同的电荷特性，采用DEAE一52阴离子交换色谱结合葡聚糖凝胶色谱对其进行分离纯化，并以纯化后的染料作为荧光探针对抗体进行标记。结果表明，当使用含0．5mol／LNazSO4的0．2mo／／LPBS缓冲液(pH7．4)进行洗脱时，DEAE一52阴离

2、子交换色谱能够将目标染料分离，得到纯度为98．4％的产物，得率57．1％。产物经活化后用于标记抗体，标记度达到4．6，与同类别的CF。647相当，达到了实用的要求。关键词：离子交换；纯化；生物标记；荧光探针中图分类号：TQ028．3文献标识码：A文章编号：1671—3206(2013)03—0440—03Studyonpurificationofwater-solublecyaninedyebyanionexchangechromatographyWANGLi—bing，QINQiu-pu，XUANGuang—s

3、han(DepartmentofPharmacy，CollegeofChemicalEngineering，QingdaoUniversityofScience&Technology，Qingdao266042，China)Abstract：Inordertoseparatethewater—solublefluorescentdyefromitsby—productswithdiferentchargecharacteristics，DEAE一52anionexchangechromatographyandge

4、lpermeationchromatographywereused．Theproductwaslabeledtheantibodyasafluorescentprobe．TheresultshowsthatDEAE-52anionex—changechromatographycanpurifythedyeefficientlywhen0．2mol／LPBS(pH7．4)withtheadditionof0．5mol／LNa2SO4wasusedaseluent．DetectingbyHPLCthepurityof

5、theproductis98．4％andyield57．1％．Afterbeingactivated．thedyewasusedtolabeltheantibody．ComparingthesimilardyeCFTM647，thedye’SD／Pis4．6．Toacquirepracticalfluorescentprobe，thismethodisconvincedtobeapplica—ble．Keywords：anionexchange；purification；biomarkers；fluorescen

6、tprobe花菁类荧光染料发现于1856年，由于其具有异作者通常采用的是制备薄层色谱法J、硅胶柱色谱常灵敏的感光能力，最初是作为光谱增感剂而被研法和制备液相色谱法-6等，上述方法分别在制备量究_1J，后来扩展至光信息存储及太阳能电池等领和生产成本等方面存在一定的不足，从而导致染料域J。在生物分析领域，随着荧光标记法逐步代替的价格昂贵，达到数千元每毫克，因此，开发高效低具有放射性危害的同位素标记法，作为荧光探针的成本的纯化方法有利于荧光染料的普及应用。花菁染料开始成为研究的热点J。由于良好的水非对称荧光染料由于具有

7、单一标记位点而应用溶性使荧光染料在生物检测方面的应用更加方便，广泛，但它的合成过程中因涉及到不同的中间体而为此染料设计者在染料的结构上引入了羟基、羧基会产生性质相似的对称染料副产物，它们与产物的以及磺酸基等强极性基团j，这在提高水溶性的同分离是影响产物纯度和最终产率的关键步骤J。时使得产物与副产物间的极性差异减小，从而提高考虑到染料和副产物带有不同数量的易电离基团，了后续分离纯化的难度。目前，国内外染料合成工尝试借助弱碱性阴离子交换剂DEAE-52对其进行收稿Et期：2013-01-05修改稿日期：2013-01

8、—16．基金项目：山东省自然科学基金项目(ZR2009CM082)作者简介：王立兵(1988一)，男，山东临沂人，青岛科技大学在读硕士研究生，师从玄光善教授，主要从事诊断试剂开发。电话：0532—88692037，E—mail：xuan@qust．edu．an通讯联系人：玄光善(1964一)，男，青岛科技大学教授，硕士生导师，主要从事药物分析。电话：0532—886920