DNA氧化性损伤生物标志物的化学发光分析新方法及应用研究.pdf

《DNA氧化性损伤生物标志物的化学发光分析新方法及应用研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、学校代码10406分类号X132密级学号080083001003题目DNA氧化性损伤生物标志物的化学发光分析新方法及应用研究作者熊萌瑶学科、专业 环境科学 指 导 教 师 颜流水申请学位日期 2011年5月学校代码：10406分类号：X132学号：080083001003南昌航空大学硕士学位论文（学位研究生）DNA氧化性损伤生物标志物的化学发光分析新方法及应用研究硕士研究生：熊萌瑶导师：颜流水教授申请学位级别：硕士学科、专业：环境科学所在单位：环境与化学工程学院答辩日期：2011年5月授予学位单位：南昌航空大学StudyoftheAnalysi

2、sMethodandApplicationofChemiluminescenceonBiomarkersofOxidativeDNADamageADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterOnEnvironmentalSciencebyMengyao-XiongUndertheSupervisionofProf.Liushui-YanCollegeofEnvironmentalandChemicalEngineeringNanchangHangkongUniversity,Nanchang,ChinaMa

3、y,2011摘要化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射确定物质含量的一种痕量分析方法。它具有灵敏度高、线性范围宽、分析快速和仪器设备简单、便于操作等优点，目前已在无机物、有机物、医用药物残留、生物大分子、生物天然活性物质等的痕量分析测定方面都得到了广泛应用。大量研究表明DNA氧化性损伤与肿瘤的发生关系密切。8-羟基-2’-脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine，8-OHdG)是DNA氧化损伤的最主要产物，可作为一种生物检测标记物，对DNA氧化损伤导致肿瘤发生的机制进行研究。本论文建立了使用化学发光法测定8-OHd

4、G的新方法，并结合商用小柱固相萃取及自制8-OHdG分子印迹聚合物作为填充物固相萃取前处理方法，对健康人体和乳腺癌患者尿样中8-OHdG的含量进行了分析检测并比较；进一步地，基于一些天然抗氧化活性物质对羟基自由基等氧化性自由基的清除作用，建立了使用化学发光法研究油茶壳提取液中原花青素对DNA氧化损伤保护作用的方法。全文共包括以下五个部分内容：第1章：绪论部分。首先简单的回顾了化学发光法的发展历史、阐述了化学发光的基本原理以及特点；然后较为全面的介绍了目前已报道的8-OHdG的测定方法及原花青素抗氧化活性的研究方法；在上述基础上，对目前研究存在的

5、问题作了简单归纳，提出了本文的研究意义。最后提出了本论文的研究目的和内容。第2章：利用8-OHdG加入酸性邻菲咯啉(Phen)-Cu化学发光体系中使体系的发光信号增强的特点，建立了一种使用化学发光法测定8-OHdG的新方法。在实验最佳条件下，方法的线性范围是1.67～333.33µg/L，工作曲线为ΔI=23.96c(µg/L)+860.85(ΔI是相对发光强度，c是8-OHdG浓度)，相关性系数R为0.9995，方法检测限(S/N=3)为0.83µg/L。第3章：建立了人尿样品中8-OHdG的固相萃取-化学发光检测方法。尿样经C18/OH柱固

6、相萃取前处理后，用化学发光法检测其中的8-OHdG浓度。实验对正常人尿样和乳腺癌患者尿样中的8-OHdG的含量分别进行了测定。测得正常人尿样中8-OHdG含量为5.77±1.56µg/L，而乳腺癌患者尿样中8-OHdG含量为67.60±27.99µg/L，是正常人的10倍多。该结果与文献报道水平基本一致。第4章：分别以8-OHdG结构相似物鸟苷（guanosine）和脱氧鸟苷（deoxyguanosine，dG）为模板分子，4-乙烯基吡啶和丙烯酰胺为功能单体，N,N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，偶氮二异丁腈为引发剂，采用本体聚合法制备了8-OHd

7、G的分子印迹聚合物。将所得的分子印迹聚合物作为固相萃取的固定相，I应用于尿样的分离和富集，回收率为86.8%～105.9%,相对标准偏差为3.0～3.5%。通过与商用C18及C18/OH固相萃取柱比较后，发现分子印迹聚合物作为固定相选择性较好，更适合用于对人体尿样等复杂样品的化学发光及液相色谱等测定的前处理。第5章：基于TSPC对羟基自由基的清除作用，建立了基于化学发光法研究油茶壳提取物中原花青素(procyanidinsofTeaoilShell简称TSPC)的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用的方法。研究中采用硫酸铜-邻菲咯啉-抗坏血

8、酸-双氧水-DNA化学发光体系，TSPC的加入对体系的发光强度具有明显的抑制作用。关键词：化学发光；8-羟基脱氧鸟苷；固相萃取；分子印迹聚合物；尿样；