植物生理实验七-电子传递实验-Dai.ppt

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1、实验七除草剂DCMU对光合电子传递的抑制作用一、实验目的掌握光合作用过程中电子传递的途径、光合电子传递抑制剂的作用原理，了解叶绿素荧光技术在光合作用研究中的应用。激发态的命运放热发射荧光与磷光色素分子间的能量传递光化学反应二、实验原理光合膜上的电子传递概况DCMU3ps250-300ps250-300μsDCMU能与D1蛋白的QB位点结合，使得QB不能与D1蛋白结合，从而阻断电子从QA向QB的传递，导致照光后QA-的积累，荧光迅速达到最大。快速荧光诱导动力学曲线叶绿素荧光5、活体叶绿素荧光的应用1931年，Kautsky发现叶绿素荧光现象并将其与光合作用

2、联系起来。此后，人们对叶绿素荧光诱导现象进行了广泛而深入的研究，并逐步形成了光合作用的荧光诱导理论，被广泛应用于光合作用研究。由于叶绿素荧光技术具有测量灵敏，对植物无伤害的优点，成为光合作用的有效探针，广泛应用到植物生态学，农学，林学，水生生物学和环境科学等领域。PEA工作原理当暗适应的植物叶片被植物效率分析仪HandyPEA提供的激发光激发后，叶片叶绿素发出荧光，荧光被具有高分辨率的监测器所记录，该监测器每秒钟可以记录10万次荧光踪迹数据，把叶绿素荧光随时间快速变化的曲线（OJIP荧光诱导曲线）准确记录下来，仪器通过分析叶绿素荧光诱导动力学曲线，反映光

3、合机构PSII的光化学活性。PEA工作原理PAM（pulseamplitudemodulation）荧光仪采用调制技术，即用于激发荧光的测量光具有一定的调制频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此PAM荧光仪允许测量背景光很强时的任何生理状态下的荧光，被广泛应用于野外操作。FIRe荧光诱导/弛豫测量系统工作原理二、器材与试剂1.实验试剂DCMU溶液浓度为5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M和1.0×10-3M2.实验仪器植物效率分析仪（PlantEfficiencyAnalyser，PEA)可调式移液器（20μl和1ml各一支）3.实验材料铜

4、绿微囊藻太湖蓝藻水华Microcystis三、实验步骤取1ml藻样到PEA样品杯中。另取4份1ml的藻样，暗适应7min，后在暗处分别加入20μl5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M、1.0×10-3M的DCMU，以及空白对照（乙醇）,继续暗适应3min。设置PEA参数：光强，100%；测定时间，1s。用PEA测定不同浓度DCMU处理藻样的快速荧光诱导动力学曲线。将PEA与电脑连接，导出测定结果；通过Biolyzer3软件获取快速荧光诱导动力学曲线各时刻荧光原始数据。以时间对数为横轴，荧光值为纵轴，通过Origin6.0软件作图。四、注意事项1

5、.PEA传递光信号的光纤务必保持伸展状态，切不可对折。2.移动PEA的荧光探头时需轻拿轻放，内有6个发光二极管，禁止碰摔。3.实验过程中小心操作，不要让液体进入仪器。五、实验作业1.实验测量之前藻细胞为什么要进行暗适应？2.实验过程中为什么要向对照样品中加入20μL乙醇？3.经DCMU处理后为什么藻细胞的荧光上升速率会加快？