实验四--细菌细胞的特殊染色模板.ppt

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1、球菌(coccus)四联球菌(tetrad)球菌(coccus)葡萄球菌(streptococcus)球菌(coccus)八叠球菌(sarcina)杆菌(bacillus)不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌3-10μm大中大肠埃希菌2-3μm螺形菌(spiralbacterium)弧菌螺菌螺杆菌实验六细菌的特殊染色（芽孢、鞭毛）肺炎链球菌荚膜荚膜炭疽芽胞杆菌肉毒梭菌破伤风梭菌单毛菌双毛菌丛毛菌周毛菌一实验目的掌握细菌的芽孢、鞭毛染色原理及方法；辨认细菌鞭毛和孢子的形态；巩固无菌操作技术。二实验原理芽孢染色由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，应当用石碳酸复红、结晶紫等进行

2、染色菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红色或浅蓝紫色的圆或椭圆形的圈。用着色强的染色剂孔雀绿或石碳酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的燃料经水洗后被染色，而芽孢一经染色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体便于区分。鞭毛染色在染色前用媒染剂进行处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛的直径加粗，然后在进行染色。三实验器材1.活材料：培养2天的枯草芽孢杆菌，培养18-30小时的大肠杆菌和变形杆菌；2.染色液和试剂：Tyler法染色液：复红染色液、香

3、柏油、二甲苯、蒸馏水、5%孔雀绿水溶液、0.05%碱性复红、0.1%美蓝染色液等；3.器材：载玻片、擦镜纸、显微镜、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯、镊子等四实验方法步骤（一）芽孢染色——Schaeffer与Fulton氏染色法（1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。（2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2—3次。（3）染色：①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持15-20min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。②水洗：待

4、玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。③复染：用蕃红液染色5min。（4）水洗、晾干或吸干。（5）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。。结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。注意事项：染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。（二）鞭毛染色——硝酸银染色法（1）清洗玻片（2）菌液的制备及制片（3）染色①滴加A液，染4—6min。②用蒸馏水充分洗净A液。③用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.5—1min（加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使玻片出现干涸区）。④用蒸馏水洗，自然干燥。（4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油

5、镜检查。结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。（三）运动性的观察1制片：在干净的载玻片上滴一滴生理盐水，取一环菌液与之混合，加0.01%美蓝与之混合均匀，盖上盖玻片；2镜检：先用低倍镜找到目标，在用高背镜观察，可用油镜观察，但注意盖玻片的厚度。结果：有鞭毛菌做直线、波浪式或翻跟斗运动。五实验报告及作业一）结果1绘出所用材料的芽胞和菌体的形态图2给出鞭毛菌的形态图二）思考1在芽孢染色涂片上为什么有时会出现大量游离的芽孢？2芽孢和鞭毛染色中对菌龄要求有何特点？为什么？