棉花GhMAPK6的表达及功能分析.pdf

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1、Supervisor：LiXuebao，XuWenliangAcademicTitle：ProfessorSign舭地』i坳．，rApprovedMay,2011⑨硕士学位论文MASTER‘STHESISmIIIIIIIqlllLIqllII]IIIIilll1111＼1898702华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以

2、明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：骆蜗日期：?,oil年-6月f日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用

3、本授权书。作者签名：凳蛹日期：加J1年6月f日导师签名：El期：伽f阵6月豸／El本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库"中全文发布，并可按“章程"中的规定享受相关权益。作者签名：臻日期：劢fJ年6月1日日期：∞牌‘月／日⑨硕士学位论文MASTER‘STHESI$摘要促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)是细胞内重要的信号分子，它是以蛋白磷酸化的形式将细胞外的刺激信号传递到细胞内，同时特异性地放大信号，并引起细胞反应的一类酶蛋白信号系统。MAPK级联系统具有高度的保守性，包括

4、3种蛋白激酶：即MAPⅪ

5、理、发育和激素反应相关。进一步的研究表明，病原体、伤害、低温、干旱、渗透、高盐和活性氧都可能引起MAPK在转录和蛋白水平及酶活性的改变。实验证明，ABA能诱导H202的合成，而H202作为逆境胁迫应答中的一个信号分子，在逆境胁迫应答中能激活一些MAPK。本研究从棉花eDNA文库中分离得到一个编码MAPK蛋白的基因(命名为Gh．A私PK6)，对该基因的表达及功能等方面进行了分析，取得如下主要研究结果：1．GhMAPK6基因的分离克隆及其编码的蛋白质序列分析从棉花eDNA文库中分离克隆了1个编码MAPK蛋白基因的cDNA，与拟南芥中AtMAPK6的同源性

6、高，因此命名为G忍^纠PK6。同时，利用PCR技术从棉花基因组中分离了长3907bp的GhMAPK6基因全长序列，通过与cDNA序列比较分析发现，GhMAPK6基因的全长结构由6个外显子和5个内含子组成。序列比较和进化分析结果表明，GhMA尸膨基因编码的蛋白属于A类MAPK蛋白。2．GhMAPK6基因在棉花中的表达分析利用qRT-PCR技术，对GhMAPK6基因在棉花组织中的表达模式进行了研究。结果表明，GhMAPK6在棉花组织中呈组成型表达，在各组织中都有表达，其中在根和下胚轴中表达量相对较高。逆境胁迫实验表明，GhMAPK6在高盐和干旱胁迫下，在

7、根中表达水平升高。而且，G胁纠纠断表达量随着ABA处理的时间变化而变化，ABA处理lh后该基因表达水平开始升高，到5h时达一个最大值。据此推测GhMAPK6可能参与ABA应答。3．GhMAPK6蛋白定位于细胞质⑧硕士学位论文MASTER‘STHESIS利用eGFP报告基因，构建这个基因ORF区域与P觎P的融合表达载体，研究GhMAPK6的亚细胞定位。将GhMAPK6-eGFP转化棉花下胚轴，获得棉花愈伤组织。利用激光共聚焦显微技术，观察GhMAPK6．GFP融合蛋白的定位情况，结果表明，GhMAPK6定位在植物细胞的细胞质中。4．过量表达GhMAPK

8、6基因能恢复拟南芥T-DNA插入突变体Atmkkl的表型为了研究GhMAPK6基因的功能，将GhMAPK6基