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《用原核翻译增强子提高人成骨生长肽基因在大肠杆菌中的.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第89卷第"期哈尔滨医科大学学报‘0S;89，X0;"+##8年!#月[>?’X5@>,=5’(X]V^(_5@?X(‘V’Y()G>./;，+##8897"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""用原核翻译增强子提高人成骨生长肽基因在大肠杆菌中的表达周凌云，刘兴汉!，余琼（哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室，黑龙江哈尔滨!"##$%）［摘要］目的用原核翻译增强子提高人成骨生长肽基因在大肠杆菌中的表达。方法将原核翻译增强子序列插入到质粒&’()*+)启动子的下游，再与成
2、骨生长肽融合蛋白基因重组。热诱导表达融合蛋白，经亲和层析、,-./012-酶切、凝胶过滤层析得到纯化的成骨生长肽。结果提高了成骨生长肽基因在大肠杆菌中的表达水平，使成骨生长肽融合蛋白的表达量超过了大肠杆菌蛋白总量的"#3。结论原核翻译增强子可提高外源基因在大肠杆菌中的表达。插入了原核翻译增强子的&’()*+)质粒可作为高效表达融合蛋白的通用质粒载体。［关键词］成骨生长肽；原核翻译增强子；大肠杆菌［中图分类号］4"!%［文献标识码］5［文章编号］!###6!7#（"+##8）#"6#8976#:!"#$%&’()*+#$*,,’%(%-./"0(%,1*%)*(
3、1’2)$%31.#*#1’4*)*(*’(!;"#$%;3’1.1.**(.0(2*%-#$%1*’(,5(1.*,’,’(’1’01’%(<=>?@ABC*DEB，@(?2ABC*F-B，G?4A0BC（!"#$%&’"(&)*+,)-."’,/&%0$(1+,)2)30，4$%5,(6"1,-$27(,8"%/,&0，4$%5,(!"##$%，9.,($）67,1$021：879*21’&*)0AH&10IJJK&1JLLA0B0MFEH-B0L/J0CJB/A.C10N/F&J&/AOJ（>PQ）CJBJAB:;-)2,;NA/F/FJ&10R-1D0
4、/A./1-BLS-/A0B-SJBF-B.J1;:*1.%4,)FJ>PQCJBJN-L.S0BJOAB/0/FJ&S-LHAO&’()*+)，ABM10B/0MNFA.F&10H0/J1F-OTJJBABLJ1/JO/FJLJUEJB.J0M&10R-1D0/A./1-BLS-/A0B-SJBF-B.J1;)FJ1J.0HTAB-B/&S-LHAON-LABOE.JOTDFJ-/;)FJMELA0B&10/JABN-L&E1AMAJO/F10ECF-MMABA/D.F10H-/0C1-&FD-BO.SJ-IJOTDM-./012-，-BO>PQN-LAL0
5、S-/JOTDCJSMAS/1-/A0B;;*,/<1,=EH-B>PQCJBJAB:;-)2,;N-LJK&1JLLJOJMMJ.*/AIJSD;=%(2*53%$4,：0L/J0CJB/A.C10N/F&J&/AOJ；&10R-1D0/A./1-BLS-/A0B-SJBF-B.J1；VL.FJ1A.FA-.0SA［!W8］成骨生长肽是由!:个氨基酸组成
6、的多肽，年国内才见到用人工合成的成骨生长肽进行其活性［"，%］具有促进成骨细胞增殖，加快骨折愈合、刺激骨髓造研究的个别报道。原核翻译增强子是噬菌体)9血等作用。临床上可用其预防和治疗骨质疏松，促主要外壳蛋白P!#H’X5上的一段序列，它通过与［:］进骨折愈合和肿瘤病人放、化疗后升高白细胞。大肠杆菌核糖体小亚基!%Y1’X5的碱基互补，提高成骨生长肽的分子量小，在生物体内的含量少，提取该H’X5的翻译水平。作者等曾将致病性大肠杆菌纯化困难。国外开展的对成骨生长肽的研究工作始肠毒素Y)!部分基因插入到噬菌体)9P!#基因的8Z于!77#年，多用人工合成的成骨生长肽
7、。人工直接端，借助噬菌体)9P!#H’X5自带的原核翻译增强子合成成骨生长肽，合成的数量有限，制约了我国在成提高P!#与肠毒素融合蛋白的表达，使P!#与肠毒骨生长肽性质和临床应用方面的研究。直到+###素融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的［9］"7;73。本实验将原核翻译增强子序列插入到质［收稿日期］+##86#:68#粒&’()*+)启动子的下游，并在多克隆位点插入凝［基金项目］国家自然科学基金资助项目（877$###:）血因子2-和成骨生长肽基因，提高了蛋白5和成［作者简介］周凌云（!79"6），女，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生。骨生长肽融合蛋白的表达水
8、平。融合蛋白的表达量!通讯作者/."哈
