橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhure2014，45(5)：818—823ISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．5．818橡胶树HbHMGRI基因克隆及其愈伤组织转化马晓晓1，李哲”，戴雪梅2，毕政鸿1，方家林2，黄华孙2，李运合3，贺永国4(1海南大学农学院，海口570228；2中国热带农业科学院橡胶研究所／农业部橡胶树生物学重点开放实验室，海南儋州571737；3中国热带农业科学院南亚热带作物研究所，广东湛江5

2、24091；4海南大学园艺园林学院，海口570228)摘要：【目的】克隆橡胶树HbHMGRl基因，转化橡胶树易碎愈伤组织，为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础。【方法】根据已经报道的HbHMGRl基因序列(NCBI登录号X54659．1)设计特异引物，通过RT—PCR克隆HbHMGRl基因，构建pCAMBIA2301—35S—HbHMGRl植物表达载体。再用EHAl05(携带pCAMBIA2301—35S—HbHMGRl，内含NPTII和ujdA基因)侵染橡胶树易碎愈伤组织，数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分

3、子检测。【结果】成功克隆了HbHMGRl基因，双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI—A2301—35S—HbHMGRl。侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色，且分子检测呈现阳性，共获得15个抗性易碎愈伤组织系。【结论】橡胶树HbHMGRl基因在愈伤组织阶段开始表达，有效提高了HbHMGRl基因在橡胶中的表达量。关键词：橡胶树；HbHMGRl基因；易碎愈伤组织；根癌农杆菌；遗传转化中图分类号：$794．1文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)0

4、5—0818—06GenecloningofHbHMGRlandgenetictransformationofcallusinHevPabrasiliensisMAXiao—xia01，LIZhe2+，DAIXue—mei2，BIZheng—hong1，FANGJia—lin2，HUANGHua—Slln2，LIYun—he3，HEYong—gll04(1C011egeofAgronoiny，HainanUniversity，Haikou570228，China；2RubberResearchInstitute，CATA

5、S／KeyLaboratoryofRubberBiology／MinistUofAgriculture，Danzhou，Hainan571737，China；3SouthSubtropicalCropResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience，Zha@ang，Guangdong524091，China；4CollegeofHorticultureandLandscape，HainanUniversity，Haikou570228，China)

6、Abstract：【Objective]HbHMGRlgenewasclonedandtheplantexpressionvectorpCAMBIA2301—35S—HbHMGRlwasconstructedtoprovideretereneesforgenetictranstormationandimprovementofHbrasiliensis．【Method]Accordingtothere—portedsequenceofHbHMGRl(NCBIaccessionNo．X54659．1)，apairofspec

7、ialprimerswasdesigned．HbHMGRlgenewasclonedsuccessfullybyRT—PCRandthevectorpCAMBIA2301—35S—HbHMGRlwasconstructed．ThenEHAl05harboringvectorpCAMBIA2301—35S—HbHMGRlwhichincludedNPTIIanduidAwasusedtoinfectfriablecallusofHbrasiliensis．Theresistantcalluswasdetectedusing

8、GUSstainingandRT—PCRaftermonthsofscreening．【Result]HbHMGRlgenewasclonedsuccessfullyanditwasusedtoconstructthevectorofpCAMBIA2301—35S—HbHMGRl．TheresultsofpCAMBI