龙眼胚性愈伤组织AGO6基因克隆及其在体胚发生过程中的表达分析

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1、江西农业大学学报２０１５，３７（１）：１４１－１４８ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓＤＯＩ：１０．１３８３６／ｊ．ｊｊａｕ．２０１５０２２杨曼曼，林玉玲，王天池，等．龙眼胚性愈伤组织ＡＧＯ６基因克隆及其在体胚发生过程中的表达分析［Ｊ］．江西农业大学学报，２０１５，３７（１）：１４１－１４８．龙眼胚性愈伤组织ＡＧＯ６基因克隆及其在体胚发生过程中的表达分析∗杨曼曼，林玉玲，王天池，赖钟雄（福建农林大学园艺植物生物工程研究所／亚热带果树研究所，福建福州３５０００２）摘

2、要：依据龙眼胚性愈伤组织转录组数据库Ｕｎｉｇｅｎｅ序列，利用ＲＴ－ＰＣＲ结合ＲＡＣＥ技术，以龙眼胚性愈伤组织ｃＤＮＡ为模板，获得ＤｌＡＧＯ６基因的ｃＤＮＡ全长序列，共３１６８ｂｐ（登录号为ＫＦ８１９５２９），完整开放阅读框２７００ｂｐ，编码９００个氨基酸。生物信息学分析表明：ＤｌＡＧＯ６的ｃＤＮＡ所编码的氨基酸序列含有２个高度保守的ＰＡＺ和ＰＩＷＩ结构域，具有典型的ＡＧＯ类蛋白的结构特征；与拟南芥ＡＧＯ６蛋白序列有较高的同源性。龙眼体胚发生过程中ＤｌＡＧＯ６表达量的ｑＰＣＲ分析表明：ＤｌＡＧＯ６在龙眼松散型胚性愈伤组织时期的表达量最高，在鱼雷形胚时期表达量最低

3、，推测ＤＬＡＧＯ６在龙眼松散型胚性愈伤组织阶段的高表达量，可能与细胞的旺盛分裂有关。关键词：龙眼；体胚发生；ＡＧＯ６；基因克隆；定量ＰＣＲ中图分类号：Ｓ６６７．２文献标志码：Ａ文章编号：１０００－２２８６（２０１５）０１－０１４１－０８ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＡＧＯ６ｆｒｏｍＥｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃＣａｌｌｕｓａｎｄＩｔｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｂｙｑＰＣＲｄｕｒｉｎｇＳｏｍａｔｉｃＥｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＤｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎＬｏｕｒ．∗ＹＡＮＧＭａｎ⁃ｍａｎ，ＬＩＮＹｕ⁃ｌｉｎｇ，ＷＡＮＧＴｉａｎ⁃ｃｈｉ，ＬＡＩＺｈｏｎｇ⁃ｘｉｏｎｇ（

4、ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＦｒｕｉｔＴｒｅｅｓ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒ⁃ｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｄａｔａｂａｓｅｏｆｌｏｎｇａｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｔｈｅＤｌＡＧ０６ｆｒｏｍｌｏｎｇａｎｅｍｂｒｙｏｇｅｎ⁃ｉｃｃａｌｌｕｓｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＲＡＣＥａｎｄＰＣＲ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｌｏｎｅｄ

5、ｆｕｌｌ—ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｓｅ⁃ｑｕｅｎｃｅｏｆＤｌＡＧＯ６ｗａｓ３１６８ｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈ（Ｇｅｎｂａｎｋ：ＫＦ８１９５２９），ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａ２７００ｂｐｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｅｎｃｏｄｉｎｇ９００ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｐｒｅｄｉｃｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｅｄｕｃｅｄＤｌＡＧＯ６ｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｔｗｏｃｏｎ⁃ｓｅｒｖｅｄＰＡＺａｎｄＰＩＷＩｄｏｍａｉｎｓｈａｄｔｈｅｔｙｐｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅＡＧＯｆａｍｉｌｙ，ｗｈｉｃｈｈａｄａｈｉｇｈｉｄｅｎｔｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅ

6、ｋｎｏｗｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａＡＧＯ６ｐｒｏｔｅｉｎ．ＴｈｅｑＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＤｌＡＧＯ６ｇｅｎｅｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｔｔｈｅｓｔａｇｅｏｆｔｏｒｐｅｄｏｅｍｂｒｙｏａｎｄｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍａｔｔｈｅｓｔａｇｅｏｆｔｈｅｆｒｉａ⁃ｂｌｅ⁃ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓ，ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔＤｌＡＧＯ６ｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｕｂｅｒａｎｔｃｅｌｌｄｉｖｉｓｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎ

7、；ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＡＧＯ６；ｇｅｎｅｃｌｏｎｇｉｎｇ；ｑＰＣＲ收稿日期：２０１４－０５－１５修回日期：２０１４－０６－２３基金项目：国家自然科学基金项目（３１２７２１４９、３１２０１６１４）、福建省重大科技平台建设项目（２００８Ｎ２００１）和福建省自然科学基金青年项目（２０１２Ｊ０５０４２）作者简介：杨曼曼（１９８８—），女，硕士生，主要从事果树生物技术研究，Ｅ⁃ｍａｉｌ：２９１１９４１３７＠ｑｑ．ｃｏｍ；∗通信作者：赖钟雄，研究员，博导，Ｅ⁃ｍａｉｌ：Ｌａｉｚｘ０１＠１６３．ｃｏｍ。·１４２·江西农业大学学报第３７卷Ａｒｇｏｎａｕｔ

8、ｅ蛋白（ＡＧＯ）是在细菌、古细菌、真菌