MS培养基的配制步骤费下载.doc

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1、MS培养基的配制步骤大量元素（母液I）mg/LNII1O333000KN0338000CaC12・2II208800MgS04・711207400KI12P043400微量元素（母液H）KI166II3B031240MnSOd・4II204460ZnS04・711201720Na2Mo04・2112050CuS04・511205CoC12・6II205铁盐（母液HI）FeS04・7II205560Na2-EDTA・211207460有机成分（母液IV）IVA肌醉20000IVB烟酸100盐酸毗哆醇（维生素B

2、6）100盐酸硫胺素（维生素B1）100tl■氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液I为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液I、母液II及母液IV的配制方法是：每种母液屮的几种成分称量完毕后，分别用少最的蒸馅水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1Lo母液HI的配制方法是：将称好的FeS04・71120和Na2-EDTA・21120分别放到450mL蒸诸水中,边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将『川调至5?5,最后定容到1L,保存在棕

3、色玻璃瓶中。各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室屮。MS培养基中还需要加入：2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、［烈宜酌NAA）、6-茱基喋吟（6-BA）等植物生长调节物质,并且分别配成母液（0?lmg/mL）o其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg,将2,4-D和NAA用少量（1mL）无水乙醇预溶,将6-BA用少量（1mL）的物质的量浓度为0.1mol/L的NdOIl溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL,即得质最浓度为0?1

4、mg./niL的母液。配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为50niL,母液II、in、IVA和IVB各5mLo再取2,4?D5mL、NAA1mL,与各种母液一起放入烧杯中。MS培养基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意：%1在使用提前配制的母液时，应在最取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶了，如呆发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；%1用量筒或移液管最取培养基母液之前,必须用所最取的母液将最筒或移液管润洗2次；%1最取母液时，最好将各种母液按

5、将要最取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗犬平分别称取琼脂9g、戏糖30g,放入1000】让的扼瓷最杯中，再加入[url水[/urmL,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂屮，最后加蒸他水定容至1000mL,搅拌均勻。需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的[url[/ur,就需要重新称最、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，

6、使溶液外溢，造成烫伤。调凶用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOlI溶液，逐滴滴入溶化的培养基屮，边滴边搅拌，并随时用持密的pll试纸（5.4〜7.0）测培养基的卩11,一宜到培养基的pll为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5・8）。培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯屮，然后将烧杯屮的培养基倒入锥形瓶（50mL或100】让）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的最约为锥形瓶容量的1/5〜1/4。毎1000mL培养基，可分装25〜30瓶。培养基分装完毕后

7、，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（毎块大小约为9cmX9cm）屮间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。