综合实验水中大肠菌群的测定.ppt

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1、水中大肠菌群的测定小组成员：秦艳邓娇王芳霞次仁曲措一、实验目的1·学习水样的采取方法，检测水中总大肠菌群的方法2·了解检测水中总大肠菌群各种方法的原理3·了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性二、实验原理大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人

2、类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验。1．初步发酵试验大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5．2（黄色）-6．8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。水样接种于发酵管内，37℃下培养，24h内小套管

3、中气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。但也有个别其它类型的细菌在此条件下也可能产气；此外产酸不产气的也不能完全说明是阴性结果，在量少的情况下，也可能延迟48h后才产气，此时应视为可疑结果，因此，以上两种结果均需继续做下面的部分实验，才能确定是否是大肠菌群。48h后仍不产气的为阴性结果。2、平板分离伊红美蓝培养基平板含有伊红与美蓝染料，亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色(龙胆紫)菌落。初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需在以上平板上划线分离菌落。3、

4、复发酵试验EMB平板上大肠菌群阳性菌落，经过涂片染色为革兰氏阴性菌且无芽孢者，通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同，经24h培养产酸又产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。三、实验器材1、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。2、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。采水样多管发酵法初步发酵平板分离复发酵试验统计查表四、实验内容步骤1、水样的采集自来水  将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭菌的三角

5、瓶接取水样，以供检测。池水、河水或湖水  将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。2、初（步）发酵实验将水样分别接入10支装有10ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，37℃培养24h，24h未产气的继续培养48h。3、平板分离将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深。4、复发酵试验经涂

6、片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管同类型菌落1－3个，37℃培养24h,结果或产酸又产气，即证实又大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管数查表XV-2(P186),即得大肠菌群数。五、实验结果与分析自来水样（ml）培养基（ml）阳性（管）10050（浓）10050（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）105（浓）六、思考题※何谓大肠菌群？主要包括哪些细菌属？※假如水中有大量的

7、致病菌，如痢疾伤寒霍乱等病原菌，用多管发酵法检测总大肠菌群，能否得到阳性结果？为什么？