病毒感染的检查及防治原则.ppt

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1、第二十五章病毒感染的检查与防治原则第一节病毒感染的检查一、标本的采集与送检1.标本采集根据临床评估及病期采集不同的标本。如呼吸道感染一般采集鼻咽洗漱液或痰液；肠道感染采集粪便；脑内感染取脑脊液；病毒血症时期取血液；作病毒分离或病毒抗原的标本，应在发病初期或急性期采集，因此时病毒在体内大量增殖，检出率高。病毒分离标本的采取，最好在发病1-2天进行。血清学检查的标本应采取双份血清送检即以发病初期和病后2-3周分别采取血清标本。双份血清同时进行检查，如抗体滴度有4倍以上升高才有诊断意义。第一节病毒感染的检查（一）标本的采集与送检1.标本采集2.标本处理标本采取必须严格无菌操作。对于本身带有杂菌

2、的标本，如粪便、咽嗽液、痰液等，应加入高浓度青霉素、链霉素、庆大霉素等处理。大多数病毒对甘油有抵抗力，送检组织、粪便标本等可置于含抗生素的50%甘油缓冲盐水中，低温保存送检。第一节病毒感染的检查（一）标本的采集与送检1.标本采集2.标本处理3.标本送检与保存病毒在室温下很快灭活，标本采集后应立即送到病毒实验室，如实验室距离较远或一时无法立即送检时，应将标本放入装有冰块的冰壶内，最好在1-2小时内送到实验室，立即进行检查或分离培养。暂时不能检查或分离培养时，应将标本存放在-70℃低温冰箱内保存。第一节病毒感染的检查（一）标本的采集与送检（二）病毒的形态学检查1.光学显微镜检查用光学显微镜可直

3、接观察痘类病毒的单个病毒体；也可直接被某些病毒受染的组织细胞中的包涵体。根据包涵体的特点，作出辅助诊断。2.电子显微镜检查1）电镜直接检查法：用于从疱疹液、粪便或血清标本中直接检查疱疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒颗粒等；2）免疫电镜检查法：将病毒标本制成悬液，加入特异性抗体混合，可使标本中的病毒颗粒凝聚成团。再用电镜，可提高病毒的检出率。第一节病毒感染的检查（一）标本的采集与送检（二）病毒的形态学检查（三）病毒的分离培养1.动物接种2.鸡胚培养3、组织细胞培养第一节病毒感染的检查（三）病毒的分离培养1.动物接种：是最原始的病毒培养方法。目前对某些病毒分离仍然应用。常用的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、

4、兔和猴等。接种途径有鼻内、皮下、皮内、脑内、腹腔内、静脉等。根据病毒种类不同，选择敏感的动物及适宜接种部位。如嗜神经病毒（乙脑病毒、狂犬病毒）可选用小鼠脑内接种，以使病毒增殖，并根据动物出现的症状特征帮助诊断。2.鸡胚培养第一节病毒感染的检查（三）病毒的分离培养1.动物接种：2.鸡胚培养：是一种经济简便的方法。一般采用孵化9-12天的鸡胚，根据病毒的特性将病毒标本接种于鸡胚的不同部位。如疱疹病毒接种于绒毛尿囊上，流感病毒初次分离接种于羊膜腔，传代培养接种于尿囊内。3、组织细胞培养第一节病毒感染的检查（三）病毒的分离培养1.动物接种：2.鸡胚培养：3、组织细胞培养将离体活组织块或分散的活细胞

5、加以培养，统称为组织培养。后者双称为单层细胞培养。是目前分离培养病毒的主要方法。通常用人胚肾细胞、人胎盘羊膜细胞、人胚二培体细胞、鸡胚等原代细胞以及传代细胞等制备单层细胞培养。病毒感染细胞后，大多数能引起细胞病变，无需染色即可直接在普通光学显微镜下观察。有的细胞不产生病变，但能改变培养液的PH，或出现红细胞吸附及血凝现象（流感病毒），有时还可用免疫荧光技术检查细胞中的病毒和细胞变化。组织培养多用于病毒分离培养和检测中和抗体，制备疫苗等。鸡胚接种（四）其他检查方法1.病毒感染的血清学检查应用血清学方法诊断病毒感染或进行流行病学调查就是利用抗原抗体能特异性结合的原理，用已知的病毒和特异性抗体检

6、测病人标本新分离的病毒株制备的抗原，或用已知的病毒抗原检查病人血清中有无相应抗体。病人恢复期血清的抗体效价必须比急性期增高4倍以上才有诊断意义。常用的方法有中和试验、补休结合试验、血凝抑制试验、免疫扩散及荧光素、酶、放射性核素标记技术等。2.病毒核酸杂交技术3.聚合酶链反应（四）其他检查方法1.病毒感染的血清学检查2.病毒核酸杂交技术是一种敏感性高、特异性强、应用面广的诊断技术和研究手段。原理是根据双股DNA具有解离和重新组合的特性，用一条已知的单链DNA，标记上放射性核素作探针与固定在硝酸纤维膜上的待测单股DNA进行杂交，再用放射自显影技术检测，以确定有无病原体存在。3.聚合酶链反应（四

7、）其他检查方法1.病毒感染的血清学检查2.病毒核酸杂交技术3.聚合酶链反应（PCR）是一种快速体外扩增特异性DNA片段的技术，能在一至数小时内通过简单的酶促反应使待测的DNA扩增至数百万倍，然后取反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，即可观察到核酸条带，不需放射性核素标记。该技术可用于病毒、细菌等微生物疾病的诊断。用于病毒培养的细胞单层人胚肺成纤维细胞单层（MRC），呈棱形非洲绿猴肾细胞单层（Vero）正常细胞细胞病变（CPE）鸡