液相色谱-串联质谱检测贝类组织中5种脂溶性贝毒素.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1714～1720DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01714液相色谱-串联质谱检测贝类组织中5种脂溶性贝毒素姚建华1’2谭志军1周德庆¨(中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛266071)2(上海海洋大学食品学院，上海201306)摘要建立了液相色谱．串联质谱分析贝类组织中米氏裸甲藻(GYM)贝毒素、螺环内酯毒素(SPXI)、大田软骨酸(OA)贝毒素、蛤毒素(PTX2)、原多

2、甲藻酸(AZAI)贝毒素的方法。用甲醇．水(4：l，WV)溶液对贝类组织中GYM，SPXI，OA。町)(2和AZAI进行提取，MAX阴离子交换柱净化后，采用液相色谱分离，除OA以负离子选择反应监测外，GYM，SPXl，PTX2和AZAl以电喷雾离子源正离子选择反应监测模式进行质谱分析。5种脂溶性贝毒素GYM，SPXl，OA，PTX2和AZAI在各自相应浓度范围内线性良好，相关系数>0．99。扇贝闭壳肌空白样品添加5种贝毒素的提取率均为78．6％一94．4％(，l=6)；精密度(RSD)为6．8％一14．9％。贝类组织中5种贝毒素GYM，SP

3、XI，OA，PTX2和AZAl的检出限分别为0．10，0．21，2．00，0．32和0．04斗g／kg。关键词脂溶性贝毒素；贝类组织；液相色谱-串联质谱1引言随着海洋环境的恶化，有害赤潮频繁暴发，人们陆续发现了一批新型贝毒素。原多甲藻酸(Azaspirzcids，AZA)贝毒素、米氏裸甲藻(Gymnodimine，GYM)贝毒素、螺环内酯毒素(Spirolides，SPX)是20世纪90年代在检测腹泻性贝毒素(Diarrheticshellfishpoisoning，DSP)过程中新发现的脂溶性贝毒素¨曲J。按FAO／IOC／WHO在200

4、4年3月都柏林(Dublin)贝类生物毒素会议以化学结构将贝类生物毒素分为8组的分类方法⋯，AZAl属于原多甲藻酸(Azaspirzcids)组，GYM和SPX属于环亚胺(Cyclici．mine)毒素组，OA属于软海绵酸毒素(Okadaicacid)组，PTX2属于蛤毒素(Pectenotoxins)组。前两组毒素的致毒机理与DSP完全不同，AZAl可引起恶心、呕吐、腹泻、胃痉挛等中毒症状，GYM和SPX可作用于呼吸道神经系统，引起与麻痹性贝毒素相似的中毒症状，SPX小鼠腹腔注射可致使小鼠在数分钟内死亡。OA能引起腹泻、腹痛等肠胃疾病；P

5、TX虽不会引起腹泻，但会损伤肝脏【8]。欧盟对AZA及OA的安全限量均为1600．g／kg贝类组织一1；对环亚胺类毒素(GYM，SPX)尚未规定安全限量¨刚；PTX的安全限量为150¨g／kg贝类组织。我国已报道了一些贝类毒素分离、提取和检测的方法，例如，江涛等【l¨采用不同浓度的HCl和HAc作提取液提取贝类中多种麻痹性贝类毒素；刘仁沿等¨21在广西北海发现了含GYM的牡蛎，在我国尚未见SPXl的报道。本课题组已建立了AzAl的液相色谱-串联质谱检测方法，并在采自大连、广州的贝类中检测出AZAl。目前，已建立了多种生物毒素的LC—MS检测

6、方法【13,14]，但是仅比较了不同固相萃取小柱的提取率，前处理方法尚需进一步完善。本研究建立了同时检测5种脂溶性贝毒素GYM，SPXl，OA，PTX2和AZAl的液相色谱一串联质谱法，完善了前处理方法，对于提高检测效率，监测贝类产品贝毒素状况具有重要意义。2实验部分2．1仪器、试剂与材料ThermoFinniganTSQQuantumAccess液相色谱-高分辨串联四极杆质谱联用仪，配有电喷雾(ESI)2010-02-01收稿；2010-05．18接受本文系困家863计划(No．2007AA09ZA38)，国家科技支撑计划项目(No．20

7、08BAA94809)资助·E—mail：zhoudq@ysfri．∞．cn第12期姚建华等：液相色谱．串联质谱检测贝类组织中5种脂溶性贝毒素1715离子源；CR22G型高速离心机(日本日立公司)；TailboysVX-3000型漩涡混合器(美国Troemner公司)；KQ-600DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Milli-Q超纯水器(美国Millipore公司)；N．EVAPll2氮吹仪(美国Organomation公司)；T18basic型均质机(德国IKA公司)；MAX阳离子交换柱(美国Waters公司)。甲醇、乙酸乙酯

8、(色谱纯，德国Merk公司)；乙腈(色谱纯，德国CNW公司)；甲酸、甲酸铵(色谱纯，德国Fluka公司)；实验用水均来自Milli．Q纯水系统。贝毒素标准品GYM，SPXl，OA