生物化学论文.doc

《生物化学论文.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、猪血中超氧化物歧化酶的提取及酶活力的测定班级：13牛技专升本学号：2013081611姓名：兰态树摘要：超氧化歧化酶（S0D）是一种重要的氧自由基清除剂，与人类健康乂密切的关系，现已被应用在食殆、化妆晶及纱品领域。本文通过从猪血屮分离纤维连接蛋口、免疫球蛋口和血红素后，提取SOD,研究温度对邻苯三酚氧化反应速度的影响。以选定实验屮最佳的PI【，然后对实验材料进行不同温度处理。通过实验得到数据，然后根据公式计算出SOD的活性关键词：SOD、温度、pH、活性引言超氧物歧化酶（SuperoxideDismutase简称SOD）是一种新型酶制齐!J。它在生物界的分布极广，儿乎从动物到

2、植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技小最具神奇魔力的金展酶、人体内的垃圾清道夫，它能够清除超氧阴离子H由基，从而有效地防御活性氧对生物体的毒害作用，具有抗氧化、抗炎症、抗衰老、抗癌、抗突变、抗辐射等功能是生命健康之本。SOD的测活方法有很多，在这些方法屮，邻苯三酚自氧化法因仪器简单，测试方便,是普遍使用的一种方法。1.材料与方法1.1试剂（1）3.8%（质量分数）柠檬酸三钠（2）0.9%（质量分数）氯化钠（3）95%（体积分数）乙醇（4）氯仿（5）丙酮（6）pH7・6、2.5mmol/LK2HP04-KH2P04缓冲液（7pH8.2、pH7.8^pH

3、8.6、50mmol/LTris-HCI（8）10mmol/LHCI猪血中超氧化物歧化酶的提取及酶活力的测定班级：13牛技专升本学号：2013081611姓名：兰态树摘要：超氧化歧化酶（S0D）是一种重要的氧自由基清除剂，与人类健康乂密切的关系，现已被应用在食殆、化妆晶及纱品领域。本文通过从猪血屮分离纤维连接蛋口、免疫球蛋口和血红素后，提取SOD,研究温度对邻苯三酚氧化反应速度的影响。以选定实验屮最佳的PI【，然后对实验材料进行不同温度处理。通过实验得到数据，然后根据公式计算出SOD的活性关键词：SOD、温度、pH、活性引言超氧物歧化酶（SuperoxideDismutase

4、简称SOD）是一种新型酶制齐!J。它在生物界的分布极广，儿乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技小最具神奇魔力的金展酶、人体内的垃圾清道夫，它能够清除超氧阴离子H由基，从而有效地防御活性氧对生物体的毒害作用，具有抗氧化、抗炎症、抗衰老、抗癌、抗突变、抗辐射等功能是生命健康之本。SOD的测活方法有很多，在这些方法屮，邻苯三酚自氧化法因仪器简单，测试方便,是普遍使用的一种方法。1.材料与方法1.1试剂（1）3.8%（质量分数）柠檬酸三钠（2）0.9%（质量分数）氯化钠（3）95%（体积分数）乙醇（4）氯仿（5）丙酮（6）pH7・6、2.5mmol

5、/LK2HP04-KH2P04缓冲液（7pH8.2、pH7.8^pH8.6、50mmol/LTris-HCI（8）10mmol/LHCI（9）50mmol/L邻苯三酚1・2材料与器材（1）猪血（新鲜猪血肝脏提取）（2）恒温水浴（3）布氏漏斗、抽滤瓶（4）烧杯、量筒、搅棒（5）透析袋（6）紫外分光光度计，（7）高速冷冻离心机，（8）微量移液器，（9）冰袋1.3方法（从猪血屮提取SOD）1.3.1分离血球取新鲜猪血，加入到3.8%朽滌酸三钠抗凝液卩，新鲜猪血与抗凝液的比例为3：1,轻轻搅拌均匀，4000r/min离心20min,收集红血球。1.3.2除血红蛋白红血球用3倍体积生理

6、盐水洗涤，4OOOr/niin离心20min,重复三次，然后向洗净的红血球加入1~1・1倍体积去离子水，搅拌溶血30min,再向溶血液屮分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置lh,然后4000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀，取清液，过滤，收集滤液（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。1.3.3热变性上清液加热到65°C,保温lOmin,然后迅速冷却到室温，3000r/min离心20min,弃去沉淀物，收集上清液（记录体积，测酶活性和蛋片浓度）。1.4邻苯三酚自氧化速率的测定取四支试管按下表加入25C预热过的

7、缓冲液，然后加入预热过的邻苯三酚（空白管用10mmol/LHC1代替邻苯三酚），迅速摇匀,立即倾入lcm比色杯中,在325nm波长处测定光吸收值，每隔30s读数一次，测定4min内每分钟光吸收值的变化。要求自氧化速率控制在每分钟的光吸收值为0.07（可增减邻苯三酚的加入量，以控制光吸收值）。1.5pH值对邻苯三酚氧化反应速度的影响。试剂空白管(mL)自氧化管l(mL)自氧化管2(mL)自氧化管3(mL)Ommol/LTris-HClPH7.82.982.98pH8.22.98PII8.62.9810mm