养血清脑颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2011年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry387～391养血清脑颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究李文博韩建平高钧倪倩杭太俊叫(中国药科大学药物分析教研室，南京210009)(天津天士力制药股份有限公司，天津300402)(中国药科大学中药分析教研室，南京210009)摘要采用变换波长检测法建立了养血清脑颗粒HPLC指纹图谱，确定了35个共有色谱峰在药材中的归属，并用液相色谱一质谱联用(LC—MS／MS)法鉴定出部分化学成分，同时对制剂中的4种指标性成分进行了

2、定量检测。结果表明，制剂与药材具有良好的色谱峰相关性，4种指标性成分在各自的浓度范围内线性关系良好(r-0．99970．9999)，并且通过2004年A版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》计算软件得出的1O批养血清脑颗粒的相似度均大于0．99。本方法可用于养血清脑颗粒的质量控制，并为其它复方制剂的研究提供了参考。关键词养血清脑颗粒；指纹图谱；高效液相色谱法引言指纹图谱是评价含多种组分的复杂中药样品的整体质量的有效手段【l1。美国FDA在植物药制品指导原则中允许申报者提供产品的色谱指纹图谱资料，德国药用植物学会、英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香

3、植物学会也都将指纹图谱作为质量控制标准的内容之一l2l。因此，建立指纹图谱对于中药复方制剂的质量控制和研究具有重要意义。养血清脑颗粒是由当归、川芎等11味中药采用现代化制剂工艺技术精制而成，具有养血平肝、活血通络的作用】，是受国家重点保护的中药品种。目前，有关该制剂质量控制方面的研究多局限于一种或一类物质的含量测定，远不能满足中药现代化的质量控制要求。本研究在建立指纹图谱的前提下，通过变换波长检测，得到了融合327和280nin下信息的色谱图，避免了单波长检测可能造成的信息缺失，从而提供了更全面的指纹信息，并将共有色谱峰在药材中进行归属，使得有关该制剂

4、的质量控制能够深入到相关药材，可以作为复方制剂质量控制体系建立的基础。2实验部分2．1仪器与试剂1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；FinniganTSQQuantumDiscovery液相色谱一质联用系统(美国ThermoFisher公司)；Milli—Q超纯水系统(法国Millipore公司)。甲醇和乙腈(色谱纯，美国Merck公司)；对照品阿魏酸、咖啡酸、迷迭香酸和黄芩苷(中国药品生物制品检定所)；养血清脑颗粒由天津天士力制药股份有限公司提供。2．2溶剂制备2．2．1对照品储备液的制备准确称取适量各对照品，用75％甲醇分别配制0．3

5、l72g／L阿魏酸，0．2912g／L咖啡酸，1．675g／L迷迭香酸，O．8368g／L黄芩苷的储备液。2．2．2制剂供试品溶液的制备准确称取0．5g养血清脑颗粒于10mL容量瓶中，加75％甲醇定容，超声20min后放至室温，用75％甲醇补足至刻度，0．45gm微孔滤膜过滤后作为制剂供试品溶液。2．2．3各单昧药材及缺昧药材供试品溶液的制备按养血清脑颗粒处方比例称取除珍珠母外的各单味药材和缺味药材，按照养血清脑颗粒的工艺制取步骤与方式制取单味药材及缺味药材的浸膏。根据浸膏的收率和各药材在组方中的用量配比，分别称取适量各单味药材及缺味药材的浸膏，按“2

6、．2．2”项方201f07—23收稿；2010-1o-10接受E—mail：tj—hang@yahoo．com．cn388分析化学第39卷法处理后，作为各单味药材及缺味药材的供试品溶液。2．3色谱一质谱条件2．3．1液相色谱条件AgilentZorbaxCl8色谱柱(250mm×4．6mm，5m)；流动相：A(O．5％甲酸)一B(乙腈)，线性梯度洗脱：0～20min，5％～13％B；20～49min，13％～30％B；49～98rain，30％～75％B。流速为1．0mL／min；柱温：4O℃；检测波长：0-32rain为327nm，32～98min为

7、280am；进样量：10。2．3．2质谱条件检测模式：全扫描和子离子扫描；离子源：ESI(+)；雾化电压：4．0kV；鞘气压力：206．85kPa；辅助气压力：137．90kPa；毛细管温度：320℃；碰撞能量：30eV；扫描范围：m／z100～1000；ESI(～)，雾化电压：3．5kV，鞘气压力：241．33kPa，辅助气压力：137．90kPa，毛细管温度：350℃，碰撞能量：35eV，扫描范围：m／z100-1000。3结果与讨论3．1制剂供试品溶液制备方法的选择分别以水、乙醇和甲醇为提取剂，并采用超声和加热回流两种提取方式。结果表明，当以75

8、％甲醇提取时，色谱图出峰数最多；超声和加热回流两种提取方式得到的色谱图无明显区别。为操作简便，