亲水交互作用-反相二维液相色谱-串联质谱同时测定乳制品中20种抗生素残留.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2015年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry714—722DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．140927亲水交互作用．反相二维液相色谱．串联质谱同时测定乳制品中20种抗生素残留王炼¨杨碧霞张新申郑洪国4冉良骥(四川大学制革清洁技术国家工程实验室，成都610065)(成都市疾病预防控制中心，成都610041)(四川大学华西公共卫生学院，成都610041)(赛默飞世尔科技中国有限公司，上海201023)摘要建立了

2、亲水作用反相二维液相色谱一串联质谱测定乳制品中口．内酰胺、四环素、大环内酯、氨基糖苷、酰胺醇、喹诺酮和磺胺7类20种抗生素残留的方法。样品与c和CN填料混合，进行基质固相分散萃取，以乙腈和水洗脱，洗脱液旋转蒸发至近干，残渣流动相溶解后分析。对样品前处理条件、色谱流动相、质谱参数进行了优化。各分析物回归方程的相关系数为0．9945～0．9998；以定量离子信噪比为3和10时所对应的样品中分析物浓度计算检出限和定量限，分别为0．10～2．40g／kg和0．33～7．92g／kg。奶粉和牛奶中添加水平25g／的加标回收率分别为72．5

3、％～97．2％和70．1％～96．8％，相对标准偏差为4．2％一8．8％和3．7％～9．9％。本方法应用于实际样品测定，结果满意。关键词亲水交互作用色谱；二维液相色谱；抗生素；基质固相分散1引言抗生素具有抑制或杀灭细菌、真菌、螺旋体、支原体、衣原体等致病微生物的作用。广义的抗生素常常包括：届．内酰胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类(Aminoglycosides，AGs)、酰胺醇类、喹诺酮类、磺胺类和多肽类1,21。作为常用的兽药，近年来抗生素常被多类混合添加在动物饲料中，以掩盖单个药物残留量超限的现象。因此，为保障食品安全

4、，建立同时检测多类抗生素的方法意义重大。AGs极性最强，采用反相液相色谱(RPLC)分离，几乎没有保留。在流动相中加入离子对试剂，通过中和电荷降低其极f生后可进行RPLC分离，但会极大增加平衡时间，且不利于与质谱联机[3}4]。亲水交互作用色谱(HILIC)使用RPLC的流动相，可分离强极性有机物，能解决了AGs的分离问题l5l6J，且易与质谱联用_7]。由于AGs和其它类抗生素极性差异大，抗生素多残留分析的难点在AGs和其它类同时提取和检测．现有方法通常只涉及4～5类抗生素_8，且AGs和其它类抗生素同时检测的方法鲜有报道。本

5、研究利用双三元高效液相色谱仪_1，外接1个可变流速泵，7条流路组成亲水交互作用与反相色谱二维液相色谱系统(HILIC．RPLC)，经三段分离，串联质谱(Tandemmassspectrometry，MS／MS)检测，建立了乳制品中的7类20种抗生素同时分离、定性定量分析的方法。对HILIC．RPLC，前人也做过一些研究，但与本方法在目的和原理上有所差异。Jandera等讨论了HILIC与RP的正交性，得出二者不能完全正交的结论[1：Wang等采用4个流路两段分离模式对12种亲水和13种亲脂的混合物进行了检测，但分析物不涉及抗生素

6、，也未对HILIC和RP都有所保留的情况进行探讨[15]；Liang等则采用了离线HILIC．RPLC的方式_1。本研究采用了HILIC．RPLC．MS／MS三段检测模式，并提出了混合基质固相分散(Mixedmatrixsolidphasedispersion，MMSPD)的样品前处理技术，较好地解决了7类抗生素同时提取并检测的难点，方法简便、快速、灵敏度高，满足国际社会食品法规的最大允许残留量要求。2实验部分2．1仪器与试剂Uhimate3000高效液相色谱仪(美国ThermoFisher公司)，带DGP．3600SD泵，带十

7、通阀和六通阀各2014．10—17收稿；2015-03—11接受本文系中国博士后面上项目(No．2012M521703)资助$E—mail：septwolvesnjwl@163．COB第5期王炼等：亲水交互作用一反相二维液相色谱一串联质谱同时测定乳制品中20种抗生素残留7151个；AXPAuxiliaryPump(美国ThermoFisher公司)；3200Qtrap质谱仪(美国ABSciex公司)；R一200旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；VortexGenius3型涡旋混匀器(德国IKA公司)：2034型真空泵(美国Wel

8、ch公司)；VisiprepTM．DL固相萃取系统(美国Sepulco公司)6mLSPE空管及配套熔融玻璃隔板(美国Agilent公司)；ChromatorexC18键合硅胶填料(40～75m，日本富士公司)；Cleanert氰基(CN)，硅胶(Silica)，