二维毛细管电泳电化学检测尿样中的β-阻断剂.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2010年5月ChineseJournalofAnalyticalChemisuT648～652D0I：10．3724／SP．J．1096．2010．00648二维毛细管电泳电化学检测尿样中的·阻断剂张效伟张召香(青岛理工大学理学院，青岛266033)(青岛科技大学化学与分子．T二程学院，青岛266042)摘要设计并制作了在柱电化学(EC)检测池，用于在同一根毛细管中进行中心切割二维毛细管电泳(2D—cE)在线纯化分离检测尿样中的6种一阻断剂。尿样先在15m

2、mol／LNaAc缓冲液中进行毛细管区带电泳(CZE)分离，带正电荷的／3一阻断剂与中性和带负电荷的干扰物质分成不同区带，然后在检测端施加13．8kPa_乐力将干扰成分从毛绌管入口端排出，同时将目标组分驱送到毛细管入口端，最后在90mmol／LNaAc一30mmol／LSDS缓冲液中进行胶束电动毛细管色谱(MEKC)分离。场放大样品堆积(FASS)／胶束推扫在柱双重富集技术不仅有效抵消压力驱送过程中产生的区带扩散，还可进一步压缩样品区带，提高检测灵敏度。本方法成功用于服药后鼠尿样品中6种口一阻断剂的分离测定，经第

3、一维CZE分离排除干扰后，在未涂层毛细管柱(60cn／×50Ixmi．d．)、90mmoL／LNaAe／HAc一30mmol／LSDS运行缓冲液、检测电位0．8V、运行电压l0kV条件下，对6种／3一阻断剂进行在线富集分离，峰高、峰面积和迁移时间的相对标准偏差(RSD)分别为2．0％～4．1％，1．4％～3．7％和0．9％～2．7％(n：6)。本研究为毛细管电泳在复杂样品在线纯化分析等方面的应用提供了新方法。关键词二维毛细管电泳；中心切割；电化学检测；口一阻断剂1引言二维毛细管电泳(2D—CE)是将分离机理不同而

4、又互相独立的两个毛细管电泳分离模式以串联方式结合。Schoenherr等¨制作了十字交叉型接口用于2D．cE分离蛋白质及其水解物；Mohan等用微透析接口连接毛细管等电聚焦(cIEF)一瞬问等速电泳／CZE分离蛋白质混合物；Zhang等用微注射器连接clEF和毛细管电色谱分离蛋白质、肽及血浆样品；文献[4～7]制作了聚砜中空纤维膜接口和蚀刻多孔膜接121，用于clEFCZE，、cIEF．毛细管凝胶电泳和cIEF一毛细管筛分电泳分离蛋白质混合物。以上报道的2D—cE均存二维切换接口处损失部分待测物、第一维分离区带在

5、接口处扩散等缺陷。Cottet等研究了在一根毛细管中进行2D．CE分离，样品进行第一维分离后，用压力将感兴趣的组分驱送到毛细管入口端进行第二维分离，但在压力驱送过程中存在严重的区带扩散。为减小扩散，将毛细管内径减小到5IxmJ，但进样量非常小，只能采用高灵敏检测器，导致分离检测体系复杂化。本研究制作了在柱EC检测池，用于在同～根毛细管中进行中心切割2D—CE分离在柱EC检测尿样中的6种一阻断剂，并在第二维分离前采用FASS／胶束推扫双重富集技术压缩样品区带，不仅抵消了压力驱送过程中的区带扩散，还可使灵敏度提高4倍

6、。2实验部分2．1仪器与试剂MPI—A型毛细管电泳仪(西安瑞迈分析仪器有限公司)；石英毛细管(60cm×50tzmi．d．，河北永年瑞沣色谱器件公司)。一阻断剂：盐酸烯丙洛尔、盐酸拉贝洛尔、马来酸噻吗洛尔、吲哚洛尔、阿替洛尔、纳多洛尔均为市售药物(青岛医保城)。十二烷基硫酸钠(SDS)、冰醋酸、无水醋酸钠和乙腈(分析纯，上海化学试剂公司)。6种卢．阻断剂药物分别用水／乙腈(1：1，)溶解，用0．22m滤膜抽滤后，分别配成1．00g／L的储备液，避光冷藏。实验用水为二次蒸馏水。20094)9．14收稿；2010-0

7、14)1接受本文系国家自然科学基金(No．20775038)和青岛科技大学博士启动基金(No．0022246)资助项目$E—mail：zhangzhx02@ustc．edu．C13第5期张效伟等：二维毛细管电泳电化学检测尿样中的口一阻断剂2．2样品处理取大鼠2只，收集空白尿样5mL。6种药物均按30g／g的剂量给药，2h后收集5mL尿样，加入1mL乙腈沉淀蛋白，涡旋混合2min，以4000r／min离心10min，过滤，冰箱保存，备用。2．3CE-EC在柱检测装置为进行在柱EC检测，参考文献[10]制作了蚀刻场隔

8、离接头。距毛细管出口端1．5cm处，用刀将毛细管一侧的聚酰亚胺涂层刮掉5mm，去掉涂层的部分毛细管放置在40％HF溶液中蚀刻3h形成一段多孑L膜，在该处均匀涂敷一层醋酸纤维素浆，待凝固后，即形成只通过电流而无溶液泄漏的场隔离接头。其检测装置如图1所示。20mPt工作电极从毛一l‘作电极曩]Workingelectrode细管出口端插入0．5cm，与场隔离接头和分离毛细P一