CdS量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2010年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry632～637DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．00632CdS量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究王洪江柳婷谢跻粟婉媛郭爱玲蔡朝霞(华中农业大学食品科技学院，武汉430070)摘要以CdC1和Na：S为原料，以巯基乙酸为稳定剂，采取水相合成方法制备了CdS量子点。结果表明，合成CdS量子点最佳条件是：作用时间3h，[cd]：[S]为2：1，50稳定剂，pH8

2、．0，反应温度30℃。通过EDC·HC1和NHS的作用，成功地将单增李斯特菌抗体IgG与CdS量子点偶联。偶联后的IgG—CdS荧光强度显著增强，为偶联前的4倍。血清凝集反应和直接免疫荧光实验证明，偶联CdS量子点的单增李斯特菌抗体的特性没有发生变化，在荧光微镜下可快速灵敏地检测出单增李斯特菌。本方法特异性强、稳定性和重复性高，可用于食品中致病菌的快速检测。关键词量子点；单增李斯特菌；偶联；荧光强度1引言CdS为Ⅱ一Ⅵ型量子点，是常见核壳型量子点的主要组成部分_1。CdS量子点具有良好的光学性质，合成发射不同颜色荧光的

3、水溶性CdS量子点对于多色生物标记和核壳型量子点合成具有重要意义。有关CdS量子点的制备的研究较多_2J，且多采用化学液相法。该方法具有反应条件温和、易控制，可制得组成均匀、纯度高的纳米材料等优点。单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes，简称单增李斯特菌)是一种能使人和动物患脑膜炎、败血症以及流产等疾病的致病菌，死亡率极高。检测单增李斯特菌的常规方法虽然准确性好，但所需时间长，操作繁琐，不能满足当前食品安全快速检测的要求。分子生物学方法快速、灵敏、特异性强，但成本较高，且要求较高的技术水准；

4、大型仪器分析方法钊如VITEK(全自动细菌鉴定／药敏系统)、MIS(微生物鉴定系统)等，虽然快速准确、检测量大，但仪器费用颇高，一般检测单位和食品企业不具备这种条件；免疫学中ELISA方法，操作简便、快速、灵敏，因而广泛应用于致病菌的检测。本研究利用纳米材料的光学性质和免疫学反应的特异灵敏性，进行了CdS量子点与单增李斯特菌抗体偶联的研究，对单增李斯特菌进行了快速检测。本方法适用于食品安全的致病菌快速检测。2实验部分2．1仪器与试剂DF一101S智能集热式恒温加热磁力搅拌器(上海东玺制冷仪器设备有限公司)；UV一170

5、0紫外分光光度计、RF一5301荧光分光光度计(日本Shimadzu公司)；JEM一2010透射电子显微镜(日本JEOLLTD公司)、Nikon80i荧光显微镜(日本Nikon公司)。单增李斯特菌抗体(本实验室制备)；巯基乙酸(TGA)、硫代乙酰胺(TAA)、CdC1·2．5HO、Na，s·9H，O和KOH(分析纯，国药集团)；N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1一乙基一(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HC1，分析纯，上海晶纯试剂有限公司)。水为去离子水。2．2CdS量子点的合成及条件优化参照并改进文献[7]的

6、方法，合成CdS量子点。在一定温度下，在100mL三口烧瓶中加入50mL去离子水和1mL0．0585mol／LCdC1，溶液，充氮气除氧20rain后加入TGA，调节pH值，继续充氮气除氧10rain后加入1mL0．0585moL／LNa，S溶液，继续通氮气除氧密闭搅拌后即得水溶性CdS量子点溶20094)9—23收稿；2009l2-30接受E—mail：guoailing@mail．hzau．edu．Clq第5期王洪江等：CdS量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究633胶。稀释后测其紫外可见吸收光谱和荧光发射光谱。

7、按表1所列条件合成CdS量子点。表1CdS量子点合成的反应条件Table1ReactionconditionsofCdSquantumdots(QDs)synthesized氯化镉硫化钠巯基乙酸pH值反应温度反应时间L且Cadmi(umc)hlorideSodi(ums)ulfideThio一gl(ycoLl)icacidTH，TM～u。Reaction(℃tem)peratureReac(tion)timemL1P-Th∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞mmmmmmmmmm2．3CdS量子点的表征分析(1)透射电子显微镜(TE

8、M)表征分析：取少量CdS溶液，用于TEM观察；(2)紫外吸收分析：取少量CdS溶液进行紫外扫描分析，扫描波长范围为200～600nlTl；(3)荧光光谱分析：将CdS量子点溶液进行荧光光谱扫描。扫描范同220．0～800．0nm，激发波长：350．0nm，激发狭缝：5．0nm，发射狭缝：5．0Ilm。如∞∞如∞如如轴∞如如∞如2