cds量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究论文

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1、CdS量子点制备与单增李斯特菌抗体偶联的研究论文王洪江柳婷谢跻粟婉媛郭爱玲蔡朝霞【摘要】以CdCl2和Na2S为原料，以巯基乙酸为稳定剂，采取水相合成方法制备了CdS量子点。结果表明，合成CdS量子点最佳条件是：作用时间3h，Cd2+∶S2-为2∶1，50μL稳定剂，pH8.0，反应温度30℃。通过EDC·HCl和NHS的作用.freelonocytogenes，简称单增李斯特菌)是一种能使人和动物患脑膜炎、败血症以及流产等疾病的致病菌，死亡率极高。检测单增李斯特菌的常规方法虽然准确性好，但所需时间长，操作繁琐，不能满足当前食品安全快速检测的要求。分子生物学方法快速、灵敏、特异性强，但成本较

2、高，且要求较高的技术水准;大型仪器分析方法6如VITEK(全自动细菌鉴定/药敏系统)、MIS(微生物鉴定系统)等，虽然快速准确、检测量大，但仪器费用颇高，一般检测单位和食品企业不具备这种条件;免疫学中ELISA方法，操作简便、快速、灵敏，因而广泛应用于致病菌的检测。本研究利用纳米材料的光学性质和免疫学反应的特异灵敏性，进行了CdS量子点与单增李斯特菌抗体偶联的研究，对单增李斯特菌进行了快速检测。本方法适用于食品安全的致病菌快速检测。2实验部分2.1仪器与试剂DF101S智能集热式恒温加热磁力搅拌器(上海东玺制冷仪器设备有限公司);UV1700紫外分光光度计、RF5301荧光分光光度计(

3、日本Shimadzu公司);JEM2010透射电子显微镜(日本JEOLLTD公司)、Nikon80i荧光显微镜(日本Nikon公司)。单增李斯特菌抗体(本实验室制备);巯基乙酸(TGA)、硫代乙酰胺(TAA)、CdCl2·2.5H2O、Na2S·9H2O和KOH(分析纯，国药集团);N羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1乙基(3二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl，分析纯，上海晶纯试剂有限公司)。水为去离子水。2.2CdS量子点的合成及条件优化参照并改进文献7的方法，合成CdS量子点。在一定温度下，在100mL三口烧瓶中加入50mL去离子水和1mL0.0585mol/LCdCl2溶

4、液，充氮气除氧20min后加入TGA，调节pH值，继续充氮气除氧10min后加入1mL0.0585mol/LNa2S溶液，继续通氮气除氧密闭搅拌后即得水溶性CdS量子点溶胶。稀释后测其紫外可见吸收光谱和荧光发射光谱。按表1所列条件合成CdS量子点。表1CdS量子点合成的反应条件2.3CdS量子点的表征分析(1)透射电子显微镜(TEM)表征分析：取少量CdS溶液，用于TEM观察;(2)紫外吸收分析：取少量CdS溶液进行紫外扫描分析，扫描波长范围为200～600nm;(3)荧光光谱分析：将CdS量子点溶液进行荧光光谱扫描。扫描范围220.0～800.0nm，激发波长：350.0nm，激发狭缝：5

5、.0nm，发射狭缝：5.0nm。2.4CdS量子点与单增李斯特菌抗体IgG偶联参照并改进文献8的方法。取水溶性量子点/磷酸盐缓冲液30μL，加入20μL60g/LEDC·HCl溶液，振荡混匀，再加入100μL0.15g/LNHS溶液，20℃温和搅拌0.5h，在持续搅拌下与含0.14mg单增李斯特菌抗体IgG的磷酸盐缓冲溶液混合、密闭，20℃继续搅拌0.5h。2.5偶联CdS量子点单增李斯特菌抗体的特性测定(1)血清凝集实验：在洁净载玻片上滴加一滴偶联CdS量子点的单增李斯特菌抗体溶液后，加适量的单增李斯特菌菌体抗原，轻轻晃动载玻片使二者混匀，观察载玻片上是否有凝集的细小颗粒。待载玻片上的反应

6、物自然干燥后用荧光显微镜观察。(2)直接荧光免疫实验：在洁净载玻片上滴加适量的单增李斯特菌灭活抗原，自然干燥，在-20℃用丙酮固定10～15min，加偶联CdS量子点的单增李斯特菌抗体溶液，37℃温育1h，取出玻片用蒸馏水洗涤，再经0.1%伊文氏兰染色、洗涤，完全干燥后在荧光显微镜下进行检测。3结果与讨论3.1CdS量子点的表征分析本实验制备的CdS量子点在TEM下观察(图1)以单分散形式存在，分散性良好，颗粒均匀呈球形，直径约5nm;UVvis分析(图2)表明，在400nm处有较强的吸收峰。图1CdS量子点的透射电子显微镜照片Fig.1TEMphotographofCdSQDs图2CdS

7、量子点的紫外吸收光谱Fig.2UVvisabsorptionspectrumofCdSQDs3.2反应时间对量子点粒径和荧光光谱的影响随着制备量子点反应时间延长，CdS量子点的紫外吸收产生逐渐红移现象。量子点的制备反应时间对量子点的荧光强度有一定影响。当反应时间为3h时，合成CdS量子点的荧光强度最强;反应时间为1h时，CdS量子点的荧光强度最弱;当反应时间为2，4和5h时，合成CdS量子点的荧光强度比较接