线粒体融合素基因-2对人骶韧带成纤维细胞增殖及功能的影响.pdf

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1、·22·中国性科学2014年6月第23卷第6期TheChineseJournalofHumanSexualityJune，2014Vo1．23No．6一陛医学·DOI：10．3969／j．issn．1672—1993．2014．06．010线粒体融合素基因一2对人骶韧带成纤维细胞增殖及功能的影响陈华云陆叶廖秦平北京大学第一医院妇产科，北京100034【摘要】目的：研究外源性线粒体融合素基因一2(Mfn2)表达对骶韧带成纤维细胞的增殖及其合成前胶原蛋白功能的影响。方法：取新鲜骶韧带组织，用组织块法在体外培养出成纤

2、维细胞。将第2—4代细胞分组：转染LV—Mfn2一GFP组(Mfn2+组)，转染LV—GFP组(Mfn2一组)和未转染组(对照组)。流式细胞仪检测细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达，RT—PCR和Westernblot检测Mfn2表达。细胞计数和cck一8法检测Mfn2对细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞周期分布。RT—PCR和Westernblot检测细胞前胶原1A1／1A2／3A1的表达。结果：转染慢病毒的成纤维细胞GFP蛋白表达率73．2％一79．1％，转染Mfn2+组成纤维细胞稳定高表达Mfn2蛋白，显著高

3、于Mfn2一组和对照组(P<0．05，both)。cck一8实验提示，转染表达Mfn2基因96h后，成纤维细胞增殖明显受到抑制，Mfn2+组细胞数显著低于Mfn2一组和未转染组(P<0．05both)；DNA直方图分析法测定显示转染Mfn2基因的细胞大部分停滞于G0／G1期，Mfn2+组GO／G1期细胞比例(60．7％±3．26％)，显著高于Mfn2一组(43．2％±3．32％)和对照组(40．8％±2．28％)，(P<0．05，both)。半定量RT—PCR和Westernblot示Mfn2+组成纤维细胞合成

4、表达前胶原1A1／1A2／3A1显著低于Mfn2一组和对照组(P<0．05，al1)。结论：Mfn2基因在体外转染成纤维细胞后，抑制细胞增殖并使成纤维细胞前胶原蛋白表达下降，可能是导致骶韧带细胞外基质减少，影响韧带纤维数量和质量的重要原因。【关键词】线粒体融合素基因一2；成纤维细胞；前胶原蛋白；增殖；细胞周期Efectsofmitofusingene一2onproliferationandfunctiOnofhumanuterosacrailigamentfibroblastCHENHuayun，LUYe，LI

5、AOQinping．DepartmentofObstetricsandGynecology，PekingUnwersityFirstHospital，Bering100034，China【Abstract】Objectives：Toinvestigatetheefectofexogenousmitofusingene一2(Mfn2)expressionontheproliferationandprocoUagenofhumuterosaeralligamentfibroblast．Methods：Takingf

6、reshuterosacralligamenttissuefromtheremovalwomb．themethodofexplantculturewasusedtogetfibroblastcel1．The2ndto4tllgenera．tionsoffibroblastsweredividedintotransfectedLV—Mfn2一GFP．transfeetedLV—GFPgroupandnon—transfect．edgroup．Thegreenfluorescentprotein(GFP)wasob

7、servedbyflowcytometry(FCM)．ThemRNAandproteinexpressionsofMfn2andprocollagen1A1／1A2／3A1incelsweredetectedbyRT—PCRandwesternblotassay．Celproliferationwasmeasuredbycck一8assay．CelcycleoffibroblastswasobservedbyFCM．Results：TheGFPpro-teinexpressionrateoffibmblasts

8、tansfeetedwithLV—Mfn2一GFPorLV—GFPwas73．2—79．1％．andMfn2genewasstablyexpressedintransfectedfibmblast／Mfn2，whichwassignificantlyhigherthanthatMfn2一groupandcon-trolgroup(P<0．05，both)．AndtransfectedM