TGF-β1siRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响.pdf

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1、递趔医堂睦亟±堂焦迨塞目录1TGF．B1siRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯311．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯351．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯361．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯402致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯413TGF．B1信号传导通路与膀胱癌关系的研究进展(综述)一YIII12I16IIoII12U13I1III攀TGF—B1SiRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响摘要膀胱肿瘤是临床上最常见的一种泌尿系统肿瘤，而且也是一种威胁患者生命的疾病。膀胱癌的生物学行为特别复杂，主要变现为：复发、多发、浸润和转移等。90％的膀胱癌是尿路上皮癌，且具有高复发性率。膀胱癌的发生、发展及复发机制目前尚不明了，近年来随着相关研究的深入，发现转化生长因子Bl(TransforminggrowthfactorsB1，TGF—D

3、1)能促进肿瘤血管的生成从而导致癌细胞的扩散转移。目的：探讨通过选择人工设计合成抑制作用最佳的TGF．B1siRNA转染入人膀胱癌细胞株进行培养，来明确TGF．plsiRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响。方法：将膀胱癌细胞株进行培养，取对数生长期的膀胱癌细胞分为常规细胞组、脂质体组(阴性对照组)和3组(A组、B组和C组)含不同TGF-BIsiRNA表达载体组。选择人工设计合成好的三种TGF．p1siRNA，通过质粒分别转染入A组、B组和C组后，转染细胞培养24小时后使用实时荧光定量聚合酶链式反应(real—timePCR)与双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(Elisa)共同检测转染TG

4、F．13】siRNA的人膀胱癌细胞株TGF—pl的表达，选出最佳抑制组。取对数生长期的膀胱癌细胞进行转染，将膀胱癌细胞分为EJ肿瘤细胞组、对照组(TGF—Bl组)、重组质粒组(TGF—BIsiRNA表达载体组)。对照组采用lOng／mlTGF—Bl刺激，转染细胞培养24小时后应用蛋白印迹法(WesternBlot)检测该组与正常EJ细胞组、TGF．p1组、重组质粒组中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果：人膀胱癌细胞株培养良好，TGF—BIsiRNA转染成功。RT-PCR检测发现：与常规培养的EJ细胞组比较，TGF—BlmRNA在转染空白质粒的EJ细胞组内的表达无统计学意

5、义(P>O．05)，表明转染的空白质粒对TGF-BlmRNA的表达无明显干扰；与常规细胞组和空白质粒组比较，TGF—BImRNA在三个不同TGF—B1SiRNA组进趟医堂睦亟±堂僮途塞EJ细胞内的表达均有显著下降(P<0．05)，其中C组最显著(P<0．01)，表明所设计的三种TGF一13lSiRNA对TGF-plmRNA的表达均具有抑制作用，其中C组TGF一131SiRNA序列与其他序列比较具有最佳抑制效果。Elisa检测发现：与常规培养的EJ细胞组比较，TGF．B1蛋白在转染空白质粒的EJ细胞内的表达无统计学意义(，P>O．05)，表明转染的空白质粒对TGF一131蛋白的表达无

6、明显干扰，与RT．PCR检测的结果一致；与常规细胞组和空白质粒组比较，TGF．B1蛋白在三个不同TGF．B1SiRNA组EJ细胞内表达均有显著下降(P

7、EJ细胞中的表达量显著减少(P