[精品]果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察.doc

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1、果蝇唾液腺染色体的制备与观察微生物技术班潘红芳2011/10/11摘要：木论文以果蝇三龄幼虫为实验材料，通过解剖分离出其唾液腺，制备染色体标木，在显微镜下观察果蠅睡腺染色体的形态特征，寻找形态良好分散适中的图像仔细观察，并根据唾腺染色体上横纹的形态和排列，识别不同的染色体。我观察到5条染色体臂，它们从染色屮心以V字形向外伸出，由于短小的第4染色体有时不易现察到，所以我只识别了5条染色体长臂。根据染色体臂末端横纹及形态特征，我识别出了两条臂，X及3R。前言：双翅目昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫期的睡腺细胞很大，其屮的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比普通染色体大得多，宽约5u

2、m,长约400um,相当于普通染色体的100—150倍，因而乂称为巨人染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且睡腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位.易位等,很容易在唾腺染色体上识别出来。各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色屮心（chromocenter）；横纹侑深浅、疏密的不同，各白对应排列，这意味着基因的排列。唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学

3、、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。实验材料：仪器用具：显微镜，果蝇培养瓶，银了，解剖针，毛笔，载玻片，盖玻片，吸水纸等药品试剂：生理盐水、盐酸、蒸帼水、改良苯酚品红染色液等培养基：玉米琼脂培养基实验材料：果蝇三龄幼虫实验方法：1-剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化帅的三龄幼虫，或考选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。每只手备持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前妊1A处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随

4、Z而出。如图。2.解离：在唾腺组织上滴一滴1NHCI,解离l-2min,以松软组织,利于染色体的分散。3.吸去HCI,用水冲洗2・3次.4.染色：滴加改良苯酚品红染液染色lOmin,染色时间不可过长，否则背景也着色。5.压片：染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上,用大拇指用力压住，并横向揉儿次。（注意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来1叫揉。）6.镜检：先用低倍镜进•行观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察。解剖针解剖钊BSTOMACHIMTESTINEfatBOO*ovarv<■••—ION'唾液腺TR4CMEfl实验结果及分

5、析:图11如图1箭头所示，确定染色中心后，可以分辨出有5条长臂与染色中心相连。由于染色体展开不成功，且4染色体臂很短，故没有观察到4染色体。我共找到了四个染色体臂的末端，但根据唾液染色体备条臂末端的形态特征，貝确定了两条臂的末端，分别是X,3R。2由图可见，X染色体臂末端有一个永久性的蓬突，虽然X染色体臂发生了弯折，但仍可辨别；虽然该染色体臂与2L臂末端有所相似，（2L臂是在末端尾处也可能存在颜色浅的蓬松），但是由课木67页图可确定，2L臂末端挨着末端蓬松处的臂有明显的横纹，颜色应该较深，但是图1屮靠近蓬松处的染色体臂颜色较浅，故可判定为X臂，而不是2L臂。3Z所以判

6、定3R臂，主要是因为3R臂末端有几条横纹，如果染色时间过长的话，很可能将数条横纹染成一条较粗的“横纹带”，即如图屮标定3R的臂的末端有一条很粗的颜色很深的“带”。4红色箭头所指处，不是染色体臂末端，应是染色体臂蓬松处受损断裂而成，故虽然该断裂处附近有一小型蓬突，也排除了它是2R染色体臂的可能。5另外两条臂末端无法辨别。6此标木压片不成功，染色体臂没有完全展开，备染色体臂交缠在一起，无法清楚判定各臂。但尚能确定由染色中心伸出了5条长臂；断臂无法准确判断。再者，此标木染色时间过长，本该染色浅的部分肴色也很深，无法清晰辨别横纹。图2此片制备较为成功，能清楚的观察到染色屮心和

7、5条长臂及「条断臂；但选择的幼虫为三龄前期或者是二龄幼虫，故染色体臂较细，不易观察横纹。我推测，由于处于三龄前期或二龄幼虫期，染色体复制示螺旋化程度诡低，或DNA复制诡未达到9次，故致使形成的染色体臂较细。实验小结:1一定要加生理盐水，否则唾液腺容易干，影响其正常形态，进而影响观察。但生理盐水不可加太多，否则幼虫会漂浮而口活跃。如水多了，请再剥离唾腺前吸走些，睡腺剥离后请勿吸水，以防将唾腺一起吸走。2.清除脂肪组织时要最力而行；在实验中，我发现如果严格按照实验步骤所写剥离唾液腺,撕裂示唾液腺将与脂肪分离，得到较干净的唾液腺，很少脂肪干扰。我多次剥离，