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1、果蝇唾液腺染色体的制备与观察微生物技术班潘红芳2011/10/11摘要:木论文以果蝇三龄幼虫为实验材料,通过解剖分离出其唾液腺,制备染色体标木,在显微镜下观察果蠅睡腺染色体的形态特征,寻找形态良好分散适中的图像仔细观察,并根据唾腺染色体上横纹的形态和排列,识别不同的染色体。我观察到5条染色体臂,它们从染色屮心以V字形向外伸出,由于短小的第4染色体有时不易现察到,所以我只识别了5条染色体长臂。根据染色体臂末端横纹及形态特征,我识别出了两条臂,X及3R。前言:双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的睡腺细胞很大,其屮的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比普通染色体大得多,宽约5u
2、m,长约400um,相当于普通染色体的100—150倍,因而乂称为巨人染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且睡腺染色体经过多次复制而并不分开,每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝,所以又称多线染色体。多线染色体经染色后,出现深浅不同、密疏各别的横纹,这些横纹的数目和位置往往是恒定的,代表着果蝇等昆虫的种的特征;如染色体有缺失、重复、倒位.易位等,很容易在唾腺染色体上识别出来。各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色屮心(chromocenter);横纹侑深浅、疏密的不同,各白对应排列,这意味着基因的排列。唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学
3、、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。实验材料:仪器用具:显微镜,果蝇培养瓶,银了,解剖针,毛笔,载玻片,盖玻片,吸水纸等药品试剂:生理盐水、盐酸、蒸帼水、改良苯酚品红染色液等培养基:玉米琼脂培养基实验材料:果蝇三龄幼虫实验方法:1-剥离唾腺:在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水,选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化帅的三龄幼虫,或考选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。每只手备持一个解剖针,在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前妊1A处,所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位,固定幼虫,右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位,适当用力向右拉唾腺腺体随
4、Z而出。如图。2.解离:在唾腺组织上滴一滴1NHCI,解离l-2min,以松软组织,利于染色体的分散。3.吸去HCI,用水冲洗2・3次.4.染色:滴加改良苯酚品红染液染色lOmin,染色时间不可过长,否则背景也着色。5.压片:染色完成后,盖上干净的盖片,并覆一层滤纸。将片子放在实验台上,用大拇指用力压住,并横向揉儿次。(注意不要使盖片移动,用力和揉动是一个方向,不能来1叫揉。)6.镜检:先用低倍镜进•行观察,找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察。解剖针解剖钊BSTOMACHIMTESTINEfatBOO*ovarv<■••—ION'唾液腺TR4CMEfl实验结果及分
5、析:图11如图1箭头所示,确定染色中心后,可以分辨出有5条长臂与染色中心相连。由于染色体展开不成功,且4染色体臂很短,故没有观察到4染色体。我共找到了四个染色体臂的末端,但根据唾液染色体备条臂末端的形态特征,貝确定了两条臂的末端,分别是X,3R。2由图可见,X染色体臂末端有一个永久性的蓬突,虽然X染色体臂发生了弯折,但仍可辨别;虽然该染色体臂与2L臂末端有所相似,(2L臂是在末端尾处也可能存在颜色浅的蓬松),但是由课木67页图可确定,2L臂末端挨着末端蓬松处的臂有明显的横纹,颜色应该较深,但是图1屮靠近蓬松处的染色体臂颜色较浅,故可判定为X臂,而不是2L臂。3Z所以判
6、定3R臂,主要是因为3R臂末端有几条横纹,如果染色时间过长的话,很可能将数条横纹染成一条较粗的“横纹带”,即如图屮标定3R的臂的末端有一条很粗的颜色很深的“带”。4红色箭头所指处,不是染色体臂末端,应是染色体臂蓬松处受损断裂而成,故虽然该断裂处附近有一小型蓬突,也排除了它是2R染色体臂的可能。5另外两条臂末端无法辨别。6此标木压片不成功,染色体臂没有完全展开,备染色体臂交缠在一起,无法清楚判定各臂。但尚能确定由染色中心伸出了5条长臂;断臂无法准确判断。再者,此标木染色时间过长,本该染色浅的部分肴色也很深,无法清晰辨别横纹。图2此片制备较为成功,能清楚的观察到染色屮心和
7、5条长臂及「条断臂;但选择的幼虫为三龄前期或者是二龄幼虫,故染色体臂较细,不易观察横纹。我推测,由于处于三龄前期或二龄幼虫期,染色体复制示螺旋化程度诡低,或DNA复制诡未达到9次,故致使形成的染色体臂较细。实验小结:1一定要加生理盐水,否则唾液腺容易干,影响其正常形态,进而影响观察。但生理盐水不可加太多,否则幼虫会漂浮而口活跃。如水多了,请再剥离唾腺前吸走些,睡腺剥离后请勿吸水,以防将唾腺一起吸走。2.清除脂肪组织时要最力而行;在实验中,我发现如果严格按照实验步骤所写剥离唾液腺,撕裂示唾液腺将与脂肪分离,得到较干净的唾液腺,很少脂肪干扰。我多次剥离,
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