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1、TSC2在人肝癌HepG2细胞中的表达及机制的初步探讨研究生：阳琼导师：曾斌副教授中文摘要目的：观察TSC2基因在人肝癌HepG2细胞中的表达，并对影响其表达的机制进行初步探讨方法:1、不同工作浓度(0、0.4umol/L>1.6Umol/L>6.4umol/L>25.6Umol/L和102.4umol/L)5-Aza-CdR⑴作用HepG2细胞，应用MTT法测不同时间(24、48、72h)细胞的增殖抑制率;2、应用RT-PCR和Westernblotting测5-Aza-CdR作用于HepG2细胞后的TSC2mRNA和tuberin蛋白的
2、表达；3、甲基化特异性PCR分别检测未经5-Aza-CdR处理和经用5-Aza-CdR处理的两组肝癌细胞HepG2中TSC2基因组启动子甲基化状态。结果:1、MTT法测得：5-Aza-CdRhJ明显抑制人肝癌细胞HepG2增殖,在终浓度为0.4umol/L>1.6umol/L>6.4umol/L>25.6umol/L和102.4umol/L的5-Aza-CdR作用人肝癌HepG2细胞72小时后，抑制率分别为(40.14土2.11)%、(48.72+3.21)%>(56.66+2.43)%>(62.24±2.43)%和(70.10±3・12)
3、%；终浓度为102.4umol/L的5-Aza-CdR作用人肝癌HepG2细胞24、48、72小时后抑制率分别为(62.90±2.14)%、(67.52±2.05)%和(70.10±3.12)%；呈现时间及剂量依赖性(P<0.05)；2、不同浓度5-Aza-CdR作用于HepG2细胞培养72小时后发现，随着浓度的增加TSC2mRXA的表达增加(P<0.05),tuberin的表达亦增加(P<0.05)；3、MSP法测得未经5-Aza-CdR处理的肝癌细胞HepG2中TSC2基因甲基化与非甲基化共存，并且甲基化程度明显高于非甲基化；加用去甲基
4、化药物5-Aza-CdR组甲基化程度明显下降；结论：TSC2作为一种抑癌基因，在HepG2细胞中表达下降，其机制可能是TSC2基因启动子区高甲基化状态所致。关键词:TSC2、5-Aza-CdR>甲基化、人肝癌HepG2细胞、增殖抑制TheresearchonexpressionofTSC2inHumanhepatocellularcarcinomaHepG2cellsandthemechanismABSTRACTObejectiveToobservetheexpressionofTSC2inHumanhepatocellularcarcin
5、omaHcpG2cellsandinvestigatethemechanismoftheexpression.Methods1.Aftertreatmentwithdifferentconcentrationof5-Aza-CdR(0,0.4,1.6,6.4,25.6and102.4pmol/L),thegrowthinhibitoryrateofHepG2cellswasassessedbyMTTassay(24h,48h,72h).2.PT-PCRandWesternblottingwereappliedtomeasuretheexpr
6、essionofTSC2mRNAandtuberinproteininhepatocellularcarcinomaHepG2cellsthatweretreatedby5-Aza-CdR.3.MethylationspecificPCRwereusedtodetectrespectivelythemethylationstatusofTSC2geneintwogroupsofHepG2cellstreatedbymediumand5-Aza-CdR・Resultsl.MTTassaydemonstratedthatlivercancerH
7、epG2cellsproliferationwereinhibitedobviousilyby5-Aza-CdR.AfterHepG2cellsweretreatedbydiferent5-Aza-CdRconcentration(0.4,1.6,6.4,25.6and102.4pmol/L)72hours,theinhibitionrateswere(40.14±2.11)%,(4&72±3.21)%,(56.66±2.43)%,(62.24±2.43)%and(70・10±3・12)%rcspcctivcly.Whilethesamec
8、oncentration5-Aza-CdRof102・4(imol/L,withprocessingtime,thelivercancerHepG2cellsproliferat
