稳定表达Bcl┐2蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定.doc

《稳定表达Bcl┐2蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、稳定表达Bclq2蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定作者：杨连君，王文亮，司晓辉【关键词】基因关键词:基因，bcl-2;癌,肝细胞;转染;基因表达摘要：目的为了探讨抗凋亡基因bcl-2在肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制，建立稳定表达Bcl-2蛋白的肝癌细胞株•方法提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒，用限制性内切酶EcoRI（酶切后经琼脂糖凝胶屯泳鉴定•用脂质休介导的基因转染法分别将pDOR-SB和pDOR质粒导入不表达Bcl-2蛋口的人肝癌细胞系HCC-9204细胞中，通过G-418筛选获得转入目的基因的阳

2、性细胞克隆•免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白的表达情况•经多次用有限稀释法连续克隆化直至获得100%稳定表达Bel-2蛋白的肝癌细胞株•结果琼脂糖凝胶电泳可见1.9kb的bcl-2基因片断•免疫细胞化学检测表明转染了pDOR-SB的HCC-9204细胞人部分有Bcl-2蛋白的表达，而转染了pDOR空载体或未转染的IICC-9204细胞均未见Bcl-2蛋白表达•经过连续3次克隆化后转染pDOR-SB的HCC-9204细胞100%表达Bcl-2蛋白•结论成功地获得了稳定表达稳定表达Bclq2蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定作者：杨连君，王文亮，司晓辉【关键词】基因

3、关键词:基因，bcl-2;癌,肝细胞;转染;基因表达摘要：目的为了探讨抗凋亡基因bcl-2在肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制，建立稳定表达Bcl-2蛋白的肝癌细胞株•方法提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒，用限制性内切酶EcoRI（酶切后经琼脂糖凝胶屯泳鉴定•用脂质休介导的基因转染法分别将pDOR-SB和pDOR质粒导入不表达Bcl-2蛋口的人肝癌细胞系HCC-9204细胞中，通过G-418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆•免疫细胞化学法检测Bcl-2蛋白的表达情况•经多次用有限稀释法连续克隆化直至获得

4、100%稳定表达Bel-2蛋白的肝癌细胞株•结果琼脂糖凝胶电泳可见1.9kb的bcl-2基因片断•免疫细胞化学检测表明转染了pDOR-SB的HCC-9204细胞人部分有Bcl-2蛋白的表达，而转染了pDOR空载体或未转染的IICC-9204细胞均未见Bcl-2蛋白表达•经过连续3次克隆化后转染pDOR-SB的HCC-9204细胞100%表达Bcl-2蛋白•结论成功地获得了稳定表达Bcl-2蛋白的肝癌细胞株，命名为HCC-bcl2.Keywords:genesbcl-2;carcinomahepatocellular;transfec-tion;geneexpr

5、essionAbstract:AIMAhepatocellularcarcinoma(HCC)cel1strainwhichcanexpressBcl-2proteinstablywasestablishedtoelucidatetheregulatingfunctionandmechanismofanti-apoptosisgenebcl-2intheapoptoticprocessofHCC.METHODSThei'eti'oviruseukQi'yoticexpressionvectorpDOR-SBcontaininghumanbcl-2genewas

6、extractedandidentifiedbyagarosegelelectrophoresisafterbeingcutwithrestrictedendonucleaseEcoRI・ThepDOR-SBandemptyvectorpDORwereintroducedintoahumanHCCce111ineHCC-9204cel1s,whichdonotexpressBcl-2protein,bylipo-some-mediatedgenetransfectionmethod・ThecellclonesintowhichpDOR-SBorpDORhadb

7、eenintroducedwereobtainedwithG-418selection.TheexpressionofBcl-2proteinwasdetectedusingimmunocytochemicalmethod・ThepDOR-SB-tranfectedcellswereclonedseveraltimescontinuallybylim-iteddilutionmethoduntilanHCCcellstrainthatcanexpressBcl-2proteinatal00%positiveratewasobtained・RE-SULTSAga

8、rosegelelectrophore