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1、探究对胶质瘤细胞产生影响的因素；1・方法;(1)本实验将C6细胞分成QO、Q50、Q100和Q1504个组,Q0组加适量二甲亚枫(DMSO，即桝皮素溶剂，每2m1DMEM全培养基中加1P1二甲亚枫,低浓度DMSO对细胞生长等无影响)处理,Q50、Q100和Q150桝皮素的浓度分别为50、100、150Umol/Lo然后将其放入37°C、5%的C02孵箱中进行培养。；(2)将三维细胞培养基质胶Matrigel置冰上或放于冰箱内2~81过夜解冻，吸管轻轻吹打，避免吸入气泡。将用高糖DMEM做1：5稀释后的Matrigel涂于Insert细胞生长面,150^2
2、00ul/cm2,37°C作用30min,备用。将饥饿12〜24h后的C6细胞制备细胞悬液，离心弃培养液,PBS洗1~2遍，用含0.1%FBS的DMEM配养基重悬细胞，将细胞密度调至于5X105个/厘米2。取200ul细胞悬液加入Transwell上室，取含10%FBS的高糖DMEM培养基500u1加入下室。37°C.5%的C02培养36h后，用棉签擦去Matrigel和上室内细胞，甲醛固定lOmino0.1%结晶紫室温下孵育lOmin,清水漂洗3遍以上。将Transwell小室翻过来底面朝上置显微镜下观察拍照，随机选取8〜10个视野进行计数。；(3)将
3、饥饿12〜24h后的C6细胞制备细胞悬液，离心弃培养液,PBS洗「2遍，用含0.1%FBS的DMEM配养基重悬细胞，将细胞密度调至于5X105个/厘米2。取200n1细胞悬液加入Transwell上室，取含10%FBS的高糖DMEM培养基500u1加入下室。37°C、5%的C02培养36h后，用棉签擦去上室内细胞，甲醛固定lOmino0.1%结晶紫室温孵育lOmin,清水漂洗3遍以上。将Transwell小室翻过来底面朝上置显微镜下观察拍照，随机选取旷10个视野进行计数。；（4）将培养好的C6胶质瘤的细胞培养基半量换液，加入lml含20umol/LEdU
4、的全培养基,其最终工作浓度为10umol/Lo将其置于37°C,5%CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液，加入10113.7%甲醛室温下固定15min,弃去固定液，用3%BSA洗两遍。然后再加入lmlO.5%TritonX-100室温下孵育20min；弃去通透液，用3%BSA洗两遍。然后加入0.5mlClick-iT反应混合液，室温下避光振荡30mino弃去反应液，用3%BSA洗1遍。然后再加入lml1XHoechst33342反应液室温下避光反应30mino用PBS清洗两遍后，将其置于激光共聚焦显微镜下拍照分析并计算其增殖细胞百分比。；（5）将收集的
5、悬浮细胞室温下400g离心5mino弃上清，加入250U1胰酶溶液（A液），用手指轻弹将其混匀，室温下反应lOmino然后再加入200U1的胰酶抑制剂和核糖核酸酶的混合液（B液），用手指轻弹将其混匀，室温下反应lOmino最后加入200U1冰冷的PI染液（C液）用手指轻弹将其混匀，4£避光反应10mino然后将其在3h内上流式细胞仪检测。；2.统计学方法；数据以均数土标准差(x土s)表示，采用SPSS13.0进行方差齐性检验及单因素方差分析(One-WayANOVA),P<；0.05为差异有统计学意义。；3结果；1•梅皮素处理36h后,Q50、Q10
6、0和Q150组的侵袭细胞比率分别为(45.81±7.55)%、(13.63±3.15)%和(4.63±1.12)%,与对照组(100%)相比，桝皮素处理组的侵袭细胞比率显着降低(P均<；0.01),W皮素能显着降低C6胶质瘤细胞的侵袭能力，且具有一定的浓度依赖性。橱皮素处理12h后，与对照组(100%)相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为57.98%±6,84%、33.60%土3.91%和11.79%±3,27%(P均<；0.05)，桝皮素能显着降低C6胶质瘤细胞的迁移能力，且具有一定的浓度依赖性。;2.桝皮素处理24h后,Q50
7、、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为21.49%.7.30%和1.12%,与对照组(45.37%)相比，其增殖细胞百分比显着降低(P<；0.01),且呈现一定的浓度依赖性。；4.讨论；本研究发现桝皮素(处理时间为24h)通过抑制核昔酸类似物Edu掺入到其细胞核中来抑制C6胶质瘤细胞的增殖,并将其阻断在S期。以上研究均证实桝皮素可明显抑制大鼠C6胶质瘤细胞的增殖，但阻断其细胞周期的环节存在差异，这可能与操作时处理的时间及其细胞生长状况密切相关；早期研究发现桝皮素可将癌细胞阻断在G0/G1期、S期或者是G2/M期；橱皮素阻断细胞在S期还是G2/M
8、期依赖于细胞的类型和对其处理的程度。该研究对胶质瘤侵袭与转移的临床研究具有一定的
