高效液相色谱图从这十种“奇葩峰”开始.doc

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1、高效液相色谱图从这十种“奇葩峰”开始......2016-01-18 实验与分析异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题，通常是指色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况，这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰,轻微的拖尾是正常的,这是由分离系统所决定的。本帖今天针对十种奇葩峰形进行分析。。。。。。无规律的基线噪音可能原因：1、漏液：检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。（如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。）2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成，先检查流动相。3、检测

2、器/记录仪电子元件的问题：（断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。）4、气泡（系统内或检测器内）：（a、用强极性溶液清洗系统b、清洗检测器。）5、流通池污染，即使是极少的污染物也会产生噪音。(a、用甲醇等极性溶剂清洗流通池b、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池）6、检测器灯能量不足，（更换灯）。7、色谱柱填料流失或阻塞。（a、更换色谱柱）8、流动相混合不均匀或混合器工作不正常。（a、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置。）有规律的基线噪音可能原因：1、在流动相、检测器或泵中有空气：（a、流动相脱气。冲洗

3、系统以除去检测器或泵中的空气。）2、漏液：（a、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。）3、流动相混合不完全：（a、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂）4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）：（a、减少差异或加上热交换器）5、在同一条线上有其他电子设备：（a、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。）2、基线漂移可能原因：1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

4、）2、流动相不均匀。流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。（a、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。）3、流通池被污染或有气体：（a、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。）4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成：（a、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。）5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。鬼峰——即使不进样也会出现的峰双峰或分叉峰峰展宽拖尾峰前伸峰负峰宽峰保留时间的异常现象分

5、析(一)保留时间变化可能的原因:1、流速变化：（a、重新设定流速）。2、泵中有气泡：（a、从泵中除去气泡）。3、流动相选择不恰当：（a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相）。4、色谱柱没有平衡（a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱；b、新安装的柱没有达到稳定状态）。(二)保留时间缩短可能的原因:1.流速增加:检查泵,重新设定流速；2.样品超载:降低样品量；3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向；4.流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀；5.温度增加:柱恒温。(三)保留时间延长可能的原因:1.流速下

6、降：管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡；2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱；3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向；4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀；5.温度降低:柱恒温。