高效液相色谱.doc

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1、ZZ高效液相色谱检测和维护大全高效液相色谱检测和维护大全（本人总结）   至于今，我进行高效液相色谱检测分析进行了近2年，在近2年的色谱仪器分析工作中，我积累了大量的色谱仪器操作和维护的经验，对本人和后来的仪器操作工作者，可以说有一定的启示和借鉴作用，所以，我是毫无保留的奉献出我的这部分经验，以感谢光临我博客的朋友！  一、色谱分析的准备工作：   在药物分析部门的工作中，对于液相色谱分析工作者而言，进行的药物分析的药物种类或品种时很多的，所以，我们在进行分析工作前，我们要对自己所要进行的药物品种和色谱柱进行统计，尽

2、量做到专药专柱、专柱专用。这样，我们在进行药物分析和检测工作时，又不会造成色谱柱的交叉污染。在做到药物分析用的色谱柱专药专柱用之后，可以明确知道该柱的流动相中缓冲液与有机溶剂的配比，快速进行流动相的配制（因为不同厂家和不同型号的色谱柱，即使分离分析同一品种的药物，其流动相的配比都是不尽相同的）。对于以后流动相的配比能做到有的放矢，也就是说，相对药物的保留时间和流动相的流速也就相对固定了下来。所以，在之后的相同药物的分析可就能顺手拿来做好了，不存在在以后的试验中还去摸索不同柱子的流动相的配比了。在以往的试验中，最常出现

3、的情况时，没有做到专柱专用，今天做这药物药调节流动相配比，明天又换根柱子，又是调节流动相配比一番，耗时又缺乏对这种药物分析时的保留时间的不可重现性。让非专业人员看了觉得不可理解。同时，对试验者本人来说，也可具有不同时间的试验比较，具有后续试验的参考意义。   二、分析前，对色谱柱的预处理和平衡过程重视。在每天的实验前，一近实验室，就立即要安排好今天该做的分析工作，连接好今天药物分析所用的专柱，打开色谱泵，用流动相中的相应有机溶剂的含10%有机溶剂的水溶液进行排气和冲洗色谱柱和管路，冲水30分钟左右，将色谱柱中的纯有机

4、溶剂替换掉，然后再用流动相进行足够时间的平衡，大约1小时左右。此时，一般来说，色谱柱应该说是够平衡了。注意在色谱柱平衡半个小时时，打开检测器，在平衡近1小时时，打开色谱工作站，点击查看基线，看基线是否走平直。在基线走平直后，方可进行分析检测，才能保证检测结果的准确性和保留时间的重复性。   三、分析前的流动相脱气、色谱管路及泵内排气和每天必须要做的事情，否则，在实验过程中，就会造成（1）泵的流速不稳、有时候流速甚至相差甚远，（2）泵压来回波动很大，（3）检测器采集的图像基线很难稳定和走直，出现基线漂移和波动。（4）色

5、谱峰面积不重现，最麻烦的是好好的色谱峰上突然出项和汽泡锯齿，影响峰面积的读取。   四、色谱分析过程中，一般是采用定量环进行手动进样或者是采用自动进样器进行进样，一般来说，能保证较好的进样量的重现性。所以在进行进样检测时，关键的步骤时溶液的配制，要做到对照品和待测样品的充分溶解，同时也要充分摇匀，使溶液均有均一性。六通阀进样器，若采用手动方式，应注意的是：你进样时，是将其从load位置扳到inject的位置，有的人是采取进样后一分钟左右又将其反扳回至load位置，这种习惯是很好的，因为在load位置，管路不通过定量环

6、，可以减少定量环的承压时间，保护定量环。但是要注意，你在这分析过程中，你始终要保持相同的处理方式，以保证测量结果的重现性。    在我们的试验分析中，我们采用称量样品和对照品的是：采用干燥洁净的2mL的小烧杯进行称量，然后小烧杯连同药品一起放在普通漏斗中，将漏斗插入容量瓶，加水或流动相进行溶解，冲洗漏斗和容量瓶，取下漏斗，加水或流动相至刻度，充分摇匀，进行进样分析。我认为这种称样和溶样方式比用称量纸称量和容样方便和准确。毕竟称量纸或多或少的具有吸湿性的，影响称量的准确性。因为在进行液相色谱分析中，药保证分析结果的准确

7、性，称样和容样也是分析结果准确性的关键的一步。     五、在样品的采集和数据或图像结果分析的过程中，要注意的是：因为色谱工作站的处理方式和能力是有限的，因为它只是人脑的机械反应结果。在色谱工作站的设置上，色谱工作站的积分设置方式都设置有两种：一种是自动积分；一种是手动积分。这两种积分方式各有其有点，但各也有其不足之处。对于仪器的自动积分方式，虽然是计分方式是方便，但是你自己去仔细观察，有时候它的积分位置很不准，所以相对来说，它所积分的峰面积结果自然是不准确的了，你若采用这种积分不准确的峰面积结果去进行计算，自然是不

8、准确的。有时候你会发现，你对某一药物的平行含量分析时，发现两个平行样的结果不平行，有时候不是你的操作引起的，是色谱工作站自动积分不准确的原因。另一种是手动积分方式，很多人是很提倡这种积分处理方式的，但是这里就存在有对图形和数据的认知的熟练程度，不同的人操作时的结果是有很大出入的。也就是说这种积分方式的难度就是：随意性大、难以掌控。我发现很多人甚