非小细胞肺癌中egfr和vegf c的表达及其临床意义.doc

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1、肺癌组织和血液中均有VEGF水平的升高，血液及淋巴结中VEGF表达水平也可作为判定肿瘤分期、预后的标志物。临床上，针对EGFR和VEGF的肺癌分子靶向治疗药物已应用于临床。但在临床中关于早期NSCLC的治疗以及靶向药物的应用都存在争议。本实验主要观察非小细胞肺癌中EGFR和VEGF-C的表达水平，探讨它们与非小细胞肺癌患者临床病理参数之间的关系，为非小细胞肺癌患者的早期诊断及预后的判断以及术后的治疗提供一定的临床理论依据。为临床治疗EGFR和VEGF・C过表达的肿瘤提供支持数据。材料与方法一、材料（一

2、）研究对象和分组收集我院2000年一2003年可手术切除的非小细胞肺癌患者石蜡包埋标本138例。男性93例（67.4%）,女性45例（32.6%）,年龄在31—80岁之间（中位年龄62岁），有吸烟史79例（57.2%）,病理类型为鳞癌70例（50.7%）,腺癌68例（49.3%）根据UICC1997年新的修订标准进行TNM分期：I期42例（30.4%）II期58例（42.0%）,ID期38例（27.5%）,淋巴结转移阳性者64例（46.4%）,阴性者74例（53.6%）。所有患者手术前均未经放、随访时

3、间60d-2719d,平均为911d。（二）主要试剂及仪器兔抗人EGFR多克隆抗体浓缩型兔抗人VEGF-C单克隆抗体浓缩型DAB试剂盒LEICARM2145型切片机LEICAST5020自动染色机LEICACV5030自动封片机光学显微镜化疗，术后均有明确的病理诊断。术后武汉博士德公司武汉博士德公司中山生物技术有限公•德国LEICA公司德国LEICA公司健国LEICA公司日本OLYMPUS公司二、实验方法（_）免疫组织化学染色1.石蜡切片，厚度4屮m于恒温箱609放置60分钟，常规二甲苯透明，梯度酒精

4、水化；1.自来水冲洗10分钟，PBS漂洗3分钟，连续3次；2.新鲜配置3%过氧化氢孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶；3.PBS洗3分钟，连续3次；5•抗原修复；6.PBS洗3分钟，连续3次；7.滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体；&每张切片加入50皿1抗（EGFR单抗1：100,VEGF-C单抗1：100）,49殍育过夜；9.PBS洗3分钟，连续3次；10.加入II抗50川室温孵育1小时；11.PBS洗3分钟，连续3次；12•加入新鲜配置DAB/过氧化氢，显色5〜10分钟；13.流

5、水冲洗10分钟后，苏木素复染细胞核，常规脱水、透明、中性树胶封片;14.镜下观察并拍照。以PBS代替一抗作空白对照。（二）结果判断染色后切片由二名有经验的病理医师阅片判读,400）计数100个肿瘤细胞中阳性细胞数。EGFR阳性染色为位于细胞浆和细胞膜的棕黄色颗粒，肿瘤细胞染色数＞10%为阳性【叫VEGF-C阳性染色细胞位于胞浆或胞膜呈清晰棕黄色颗粒定为阳性细胞。依据着色的阳性细胞数及胞浆着色强度进行判定，每片计数10个高倍镜视野，阳性细胞数＜10%者记为阴性，阳性细胞数M10%者记为阳性⑺。（三）统计

6、学方法应用SPSS11.5软件进行统计学分析，EGFR和VEGF-C表达水平与各临床病理参数之间的比较采用X2检验（Chi-square）；用X2检验中的Spearman相关性分析法计算EGFR和VEGF-C表达的相关系数R,并分析其相关程度；各指标与随访患者无病生存时间的关系采用Kaplan-Meier统计分＞Log-rank检验＜0.05有统计学意义•结果一.NSCLC患者的病例特点：138例NSCLC患者的病例特点如表1所示:ClinicopathologicfactorsNo.(%)Age(y

7、rs)<6273(52.9)M6265(47.1)GenderMale93(67.4)Female45(32.6)SmokingstatusSmoker79(57.2)Non-smoker59(42.8)HistologictypeSquamouscell70(50.7)Adenocarcinoma68(49.3)DifferentiationPoor32(23.2)Well/Moderate106(76.8)TstageT1+T2112(81.2)T3+T426(18.8)LNMLMN(+)64(4

8、7.4)LNM(-)74(53.6)TNMstageIStege42(30.4)IIStage58(42.0)IIIStage38(27.5)二、EGFR、VEGF-C在NSCLC中的表达及与各个临床病理参数之间的关系：(-)EGFR、VEGF-C在NSCLC中的表达:图1.EGFR在鳞状细胞癌（a）腺癌（b）中的表达（100X）图2.VEGF-C在鳞状细胞癌(c)和腺癌(d)中的表达(100X)(二)EGFR、VEGF-C在NSCLC中的表达与NSCL