课题1微生物的实验室培养学案.doc

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1、课题1微生物的实验室培养学案班级姓名【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】尢菌技术的操作基础知识一、培养基1.概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其—的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2.营养构成：各种培养基一般都含有、、和,此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3.培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌吋需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。K思劣1》从细胞的化学元索组成來看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【例1】下列关于微生物营养的说法，止确的是（）A.同一•种物

2、质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量c.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也能提供能量二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：（一）获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：1.对实验操作的—、操作者的和进行02.将用于微生物培养的、和等器冥进行。3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在—附近进行。4.实验操作时应避免己经灭菌处理的材料用具与相接触。（二）消毒和灭菌1.消毒是指，常用的方法有、.消毒法。2.灭菌是指.常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？K思考2》无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？K思考32

3、利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？K思考4』物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀,煮沸并排除锅内冷空气，其目的是;随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为,并维持:最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，英目的是防止【例2】细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）A.接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅实验操作-一-大肠杆菌的纯化培养:本实验所用的培养基是,本实验可分成和两个阶段进行。一、制备牛肉膏蛋

4、白腺固体培养基1制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的操作步骤是：K思考5』在制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的称量操作屮，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅扌半的目的是什么？K思考6』牛肉膏和蛋白腺主要为微生物提供什么等营养物质？2.倒平板：待培养基冷却至°C左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：%1在火焰旁右手拿，左手;%1使锥形瓶的瓶口;%1左手将培养皿,右手,立刻盖上皿盖。%1待平板冷却凝固后，将平板0K思考7》锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？K思考8》倒平板的目的是什么？K思考9』若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？K

5、思考10』配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？【例3】以下关于制备牛肉膏蛋白豚固体培养基的叙述错.误的是（）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯C.待培养基冷却至50°C左右时进行倒平板D.待平板冷却凝固约5〜10min后将平板倒过来放置二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外述有穿刺接种和斜面接种等。1.平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至=%1在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。%1将菌种试管口通过火

6、焰达到的目的。%1将冷却的接种环伸入到0%1将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。%1将皿盖打开一条缝隙，把接种环,盖上皿盖，不要划破培养基。%1灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。%1将平板培养。K思考口』取菌种前灼烧接种环的目的星什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？1.稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度櫛释,然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系

7、列稀释操作：%1取盛有mL水的无菌试管6支，，编号101、102、103、104、105、106□%1用灼烧冷却的移液管吸取—mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。%1从101倍液中吸収mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。K思考12』系列稀释操作的注意事项是什么？K思考13』涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3培养12h和24h后的菌落大小二；菌落分布位置？原因？K思考143在某培养基上出现了3种特征不同的菌落

8、是什么原因？K思考15』频繁使用的菌种