课题1微生物实验室培养.doc

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1、课题1微生物的实验室培养【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】无菌技术的操作【课题难点】无菌技术的操作基础知识一、培养基1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？[来源

2、:Z#xx#k.Com]【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。【补充2】培养基包括哪些营养成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：(一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：[来源:学#科#网Z#X#X#K]1．对实

3、验操作的、操作者的和进行。2．将用于微生物培养的、和等器具进行。3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。(二)消毒和灭菌1．消毒是指。常用的方法有、、消毒法。2．灭菌是指。常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续

4、加热，气压升至8，温度为，并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止实验操作----大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是，本实验可分成和两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：、、、、。〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①在火

5、焰旁右手拿，左手；②使锥形瓶的瓶口；③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝固后，将平板。〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？〖思考8〗倒平板的目的是什么？〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大

6、肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷却的接种环伸入到。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。⑧将平板培养。8〖思考11〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列

7、的梯度稀释，然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。　系列稀释操作：①取盛有mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。②用灼烧冷却的移液管吸取mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。③从101倍液中吸取mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。〖思考12〗系列稀释操作的注意事项是什么？〖思考13〗涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1　培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2　在肉汤培养基上，大肠杆菌

8、菌落颜色？形态？3　培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？〖思考14〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？〖思考15〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？六、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要