项目5：培养基的制作.doc

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1、项目5：培养基的制作【目的要求】1.掌握常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。【实验内容】培养基是指在人工培养细菌时，提供给细菌生长繁殖所必需的营养物质的制品。基础培养基中所含的营养物质能满足一般病原菌生长繁殖所需的氮源、碳源和无机盐等。在基础培养基的基础上添加一些特殊成分（如糖类、血液、抑制剂等）则可制成营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。常用的培养基根据用途不同分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、厌氧培养基和活纽.织培养基等六类。任何培养基除含有必需的营养物质外,还必须有一定的酸碱度，并保证无菌。最常'用的基础培养基按照培养基的物理性

2、状不同又分为液体、固体和半固体三种。培养基主要用途是；①分离并繁殖细菌；②保存菌种；③鉴定细菌；④生产疫苗、抗生素及供细菌学的研究。（-）肉汤培养基肉汤培养基是帘用的液体培养基，也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。【材料】牛肉、蛋白东、氯化钠、水（蒸饰水或自来水）、比色管、蒸馆冰、10%碳酸氢钠、10%醋酸、0.02%酚红指示剂、吸管等。【方法1】1.取新鲜瘦牛肉，除去脂肪及筋膜，切成小块后并用绞肉机绞碎，每5（X）g碎牛肉加水1000ml,混合后，置4°C冰箱过夜。2.次日収出煮沸半小时左右，使肉渣全部凝固，加热过程中不吋地用玻璃棒搅拌，以免沉底，也可以

3、不放置冰箱过夜，直接煮沸1小吋。3.用纱布过滤，弃去肉渣（肉液中的液休应尽量挤净），于滤液中加入1%蛋白腺及0.5%氯化钠，加热溶解，并补足失水至1000mlo4.冷至50°C左右，用精密pH试纸测酸碱度，用校止pH为7.6左右。过碱时，可用10%醋酸校正5.分装于试管中或三角烧瓶中，15磅（121°C）高压蒸气灭菌20〜30mino备用。【方法2】用市售的牛肉膏代替新鲜肉汤时，可将牛肉膏溶成0.3%〜0.5%的水溶液，再如上法制成培养基。1.称最熔化：用电子天平称取牛肉浸膏（3〜5g）、蛋白腺（10g）.氯化钠（5g）,倒入三角烧瓶中，加入1000ml蒸憎水，加热熔化。

4、2.用精密pH试纸测酸碱度，用10%碳酸氢钠校正pH为7.2左右。过碱时，可用10%醋酸校正之。1.分装于试管中或三角烧瓶'I1,15磅（121°C）高压蒸气灭菌20〜30mino备用。（-）普通琼脂固体培养基1=普通琼脂培养基是常用的固体培养基，包括普通琼脂平板和普通琼脂斜而两种，前者用于分离纯种细菌，后者用于增殖纯种细菌或保存菌种。琼脂是山海藻中提出的i种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用。加入培养基的目的是使Z固态化，因其溶化点为ioo°c,凝固点约为40°C,利用此特点，加至肉汤后，竣热可制成斜而、高层、平板等不同类型的培养基,以供分离培养、繁殖细菌等用。细菌不能

5、分解琼脂,故无营养作用，仅是周休培养基的赋形剂。【材料】1.肉汤或肉膏汤、琼脂、营养琼脂粉2.洁净试管、无菌培养皿、三角烧瓶、电热套等【方法1】1.于100亳升PH7.6的肉汤或肉膏汤培养基中加人2〜3克琼脂。加热溶化，调止酸碱度至PH7.4〜7.6,必要时以脱脂棉过滤，除去杂质。分装后，高压蒸汽15磅灭菌20分钟。2.如需制成琼脂平板，将灭菌后的肉汤琼脂，待冷至50°C左右吋，以无菌操作倾入无菌的培养皿内，冷凝后即成。如需制备琼脂斜而，将肉汤琼脂溶化，分装试管内，灭菌后趁热将试管斜置，冷凝后即成琼脂斜而培养基。【方法2】普通琼脂培养基也可用市售的营养琼脂粉（含有普通琼脂

6、培养基的各种成分并己调好pH）制备，用法见产品说明书。1.用电子天平称取市售营养琼脂粉4.2g,倒入三角烧瓶中，并在三角烧瓶中加入lOOmL蒸锚水，加热溶化。分装后，高压蒸汽15磅灭菌20分钟。2.如需制成琼脂平板，将灭菌后的肉汤琼脂，待冷至50°C左右时，以尢菌操作倾入无菌的培养皿内，冷凝后即成。如需制备琼脂斜面，将肉汤琼脂溶化，分装试管内，灭菌后趁热将试管斜證，冷凝后即成琼脂斜面培养基。（三）普通琼脂半■駅ra体培养基肉汤琼脂半固体培养基系于肉汤中加入0.3%〜0.5%琼脂制成。本培养基常用作细菌动力检查和细菌菌种的保存。【材料】1.肉汤或肉膏汤、琼脂2.小试管【方法

7、】1.于100毫升肉汤内加入0.3〜0.5克琼脂，加热溶化，必要时用脱脂棉过滤。2.分装小试管（约1/3高度），塞好棉塞。高压蒸汽15磅灭菌20分钟，直立冷凝即成。实验报告】记录培养基的种类及基础培养基的制备程序。