各种培养基的制作方法.doc

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1、配方一萨氏（Sabouraud's）培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。　1.营养肉汤培养基　　牛肉膏0.3克　　蛋白胨1.0克　　NaCl0.5克　　水100毫升　　pH7.0～7.2　　在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。　　2.营养琼脂培养基　　在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。　　3.

2、肉汁蛋白胨液体培养基　　牛肉500克　　蛋白胨10克　　NaCl5克　　pH7.1～7.2　　取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。　　将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。　　4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）　

3、　可溶性淀粉2克　　K2HPO40.05克　　MgSO4·7H2O0.05克　　KNO30.1克　　NaCl0.05克　　FeSO40.001克　　琼脂2克　　水100毫升　　pH7.2～7.4　　在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。　　5.马铃薯蔗糖培养基　　马铃薯200克　　蔗糖10克　　琼脂20克　　水100

4、0毫升　　自然pH　　称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。　　6.麦芽汁培养基　　将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。　　7.察氏培养基　　NaNO32克　　K2HPO41克　　KCl0.5克　　MgSO40.5克　　FeSO40.01克　　蔗糖30克　　琼脂15～20克　　水1000毫升　　自然pH　　分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。　　8.豆芽汁葡萄

5、糖（或蔗糖）培养基　　黄豆芽100克　　葡萄糖50克　　琼脂15克　　水1000毫升　　称取新鲜黄豆芽100克，放入烧杯中，加1000毫升水，煮沸30分钟，用纱布过滤，补足失水。再加葡萄糖（或蔗糖）50克，琼脂15克，加热至融化，补足失水。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。常用于培养霉菌。　　9.伊红美蓝培养基（E、M、B培养基）　　乳糖10克　　蛋白胨5克　　NaCl5克　　K2HPO42克　　2%伊红水溶液20毫升　　0.35%美蓝水溶液20毫升　　琼脂20克　　水1000毫升pH7.2　1.配制溶液　　向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的

6、配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。　　配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。　　2.调节pH值　　用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。　　3.过滤　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸

7、折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。　　4.分装　　已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。　　分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。　　装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫

8、升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。　　5.加棉塞　　分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞