非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用.doc

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1、非接触式共培养技术在体外细胞实验中的初步应用作者：赵学铭，刘易欣，倪春生，赵秀兰，孙涛，古强，孙保存【关键词】，间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养，［摘耍］目的研究与恶性黑色素瘤细胞进行非接触式共培养的间充质干细胞表型变化，从而明确非接触式共培养体系可以应用于两种细胞之间相互作用的研究。方法利用Transwell进行非接触式共培养，分析间充质干细胞形态变化，利用免疫组织化学与免疫荧光检测其VW因子和CD34表达。结果间充质干细胞在非接触式共培养体系中可以被恶性黑色素瘤细胞诱导为多角形或短梭形，同时VH1因子和CD34表达

2、上调。结论初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的间充质干细胞中部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。［关键词］间充质干细胞；恶性黑色素瘤；非接触式共培养Primaryapplicationofinvitrocellresearchbyindirectcoculturesystem[Abstract]ObjectiveTostudythephenotypechangeandinteractionsofmousebonemarrowderivedmesenchymals

3、temcel1sinducedbyB16,amousemalignantmela.noma.cellline・Methods!ndirectcoculturewasbasedontranswel1systemtoanalysethephenotypechangeofMSC・DeterminationoftheexpressionofVIIIfactorsandCD34byimmunohistochemistryandimmunof1uorescence・ResultsMSCwasforminpolygonandfusiformi

4、nducedbyB16・Thentheimmunohistochemistryandimmunof1uorescencestainingshowVUIfactorsandCD34wasupregulationofMSC・ConclusionTheresultsoftheindirectcocultureexperimentswithB16cellandMSCinvitrocaninitiallyconfinnthatpartsoftheMSCtransformtheirphenotype,itmeansthatindirectc

5、oculturesystemmayusedincellinteractionresearchinvitro.mesenchymalstemcel1s;malignantmelanoma;indirectcocuuture间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)是指存在于骨髓基质中的非造血组织的另一类重要的干细胞，它最显著的生物学特征是既有自我更新的能力，乂具有向多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化的潜能［1,2］。它有着广泛的来源，包括骨髓、骨骼肌、软骨、骨、肌腱等，故在干细胞研究领域中具有突出的优势

6、及非常重要的理论研究意义和临床应用价值O笔者希望通过进行MSC细胞和恶性黑色素瘤细胞的非接触式共培养，观察不同培养条件下的MSC形态，检测多种指标免疫组织化学染色结果、分析差异，初步表明与恶性黑色素瘤细胞非接触式共培养的MSC屮部分细胞表型发生改变，明确非接触式共培养体系可以应用于MSC和恶性黑色素瘤细胞之间相互作用的研究。1材料与方法1.1实验动物小鼠源性间充质干细胞，天津医科大学病理教研室。小鼠源性恶性黑色素瘤细胞B16细胞系，环湖医院细胞室。1.2主耍实验试剂CD34,兔抗小鼠TgG多克隆抗体，Santacruz公司，货号

7、sc-9095。VUI因子，兔抗小鼠IgG多克隆抗体，基因公司，货号GA008202o1.3主要实验器材倒置相差光学显微镜，Olympus公司。图像采集系统,Nikon/Dell公司。自动控制恒温培养箱,Jouan公司oTranswell,0.4um孔径，Costar公司。1.4非接触式共培养体系中B16细胞对MSC细胞的诱导分化作用1.4.1MSC细胞与B16细胞非接触式共培养实验选取MSC细胞和B16细胞，进行细胞计数，配制成浓度为3.0X104个/ml的MSC预培养工作液和浓度为7.5X104个/ml的B16预培养工作液。

8、将lmlMSC预培养工作液加入对应的Transwell预培养孔中；将0.lmlB16预培养工作液加入Transwell屮的共培养插件屮，再将0.6ml培养基，沿侧壁缓缓注入下层小室，样品编号，预培养24h后，取出Transwel1培养板，将各孔及共培养插件中原有