芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究.doc

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1、芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究河南农业科学，，：？芝麻染色体常规制片技术关键因了的优化研究刘艳阳，郑永战，梅鸿献,张海洋河南省芝麻研究屮心，河南郑州摘耍:为了探索最佳的染色体制片方法，以芝麻活体种子根尖为材料,研究根尖预处理方法、解离时间、取材长度和染色方法等关键因了对芝麻染色体制片的影响。结果表明,预处理方法为/的放线茵酮溶液处理、饱和对二氯苯溶液处理或・/一疑基口奎咻溶液处理；取材长度为・~・；在精：浓醯:的解离液中解离;染色液以改良石碳酸品红染色染色体制片效果最佳。关键词:芝麻;染色体制片；处理因了中图分类号：・文献标识码：文章编号：？一一，？，？，?,,:,,?.:/?,?,

2、・/一；：一••QQ••••»••,••••»»芝麻・具有悠久的栽培了研究。近年来，国内外对芝麻的种植和应用研究丿力史，具有较高的营养和保健作用，在中国种植比较较多，但主要集中在栽培技术、抗病抗逆性、种质资广泛，是重要的油料作物。国外首次对芝麻染色体源表型鉴定和分子水平遗传多样性分析等方而，对数目的报道始于世纪年代，等首先其细胞学方面的研究较少。报道栽培种芝麻的染色体数口是一。染色体常规制片是细胞遗传学研究的基础手和等口进行了芝麻染色体段，高质量的染色体中期分裂相是研究物种亲缘关长度等的研究。我国对芝麻的细胞学研究始于上世系、遗传结构、倍性及细胞周期等的前提。随着现纪年代，柳家荣等、何凤发等、

3、詹英贤等【代生物技术发展产生的原位杂交对染色体制对不同粒色的栽培种和野生芝麻的染色体组型进行片技术也提出了更高要求。作为供原位杂交收稿日期：一？基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金资助一;公益性行业科研专项经费项口？作者简介:刘艳阳一，女，河南汝阳人，助理研究员，博士，主要从事芝麻种质资源及遗传育种研究。9••••通讯作者:张海洋一，男，河南项城人，研究员，博士，主要从事芝麻遗传育种研究。？:•第期刘艳阳等:芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究Z用的染色体，需满足每一制片具有完整染色体的个以上染色体分散较好的细胞，确定该材料的染色细胞较多、染色体在细胞中分布合理、数目结构完整体数目。

4、这些基本条件『。以往的芝麻细胞学研究，只对・数据统计选择有代表性的制片，每张制片随机选取~个试验结果进行描述，针对芝麻染色体制片过程中关键因子进行全面、系统的研究冃前尚未见到相关报视野，分别统计被观察的细胞总数和分裂小期的细胞道。为此，研究了根尖预处理方法、取材长度、解离数，计算中期分裂和指数。中期分裂相指数是指处于时间和染色方法对芝麻根尖染色体制片效果的影分裂中期细胞数与被观察的细胞总数之比，用千分数响，以总结出一•套行Z有效的芝麻染色体制片技术，表示，以表征根尖细胞经预处理后处于分裂中期和细胞数的比例。利用显微镜及其采图软为芝麻细胞学方面的深入研究提供依据。件进行拍照、计数、统计和分析。材

5、料和方法结果与分析・材料・芝麻染色休制片技术的优化试验材料为栽培种芝麻豫芝号。..预处理方法对芝麻染色体制片效果的影响・方法与步骤・・材料培养在培养川L内铺上层滤纸，在湿从表可见,根尖用•秋水仙索预处理获得的润的条件下将种子培养萌根，在°C左右的温度下，小期分裂相指数最高•，其次是•秋水待萌发后根长达•~•时进行取材。仙素进行预处理和，中期分裂相指数分别是・・预处理液及处理时间的比较采用根尖不离.％和•％°。•秋水仙素处理和、休处理，用秋水仙索・％一羟.秋水仙索预处理和、饱和对二氯苯处理、/和/放线菌酮水溶液处理、基唾I林水溶液./、./、.和、冰水混合物处理均能得到较多的屮期分裂/、.秋水仙

6、素：・/〜為基n奎啦水溶液一：体积比、饱和对二氯苯含一澳奈、相。.秋水仙素预处理、和，.秋水・/一疑基唾咻水溶液添加饱和对二氯仙素处理和，・秋水仙素预处理和虽然能得到较多中期分裂和，但染色体容易聚集成团，不苯、放线菌酮水溶液/、/、/利于进行核型分析。/和/放线菌酮水的放线菌酮水溶液添加饱和对二氯苯、・/溶液预处理容易引起染色体收缩，尽管利于染色体风油精，分别处理、、、和，冰水混合物分别处理、和，共个处理，以确定适宜计数但不利于染色体形态观察。.秋水仙索预处的预处理方法。理和，冰水混合物处理虽然能得到较多小期分裂和，但染色体容易聚集成团，制片效果不好。・・解离在水酒精：盐酸一：的解离液中・秋水

7、仙素溶液处理图一、饱和对二氯苯解离、、、，以确定适宜的解离时间。处理图一、/的放线菌酮水溶液添加饱…取材长度分别切取根尖・、、和对二氯苯处理图一得到的制片染色体分散、进行压片观察，以确定适宜的取材长度。良好,适宜进行核型分析，但小期分裂和指数较低。综・•染色分别加一滴醋酸洋红或改良石碳酸品合染色体制片效果及中期分裂相指数，确定/红染色、、、和，以确定适宜的放线菌酮处理图一、饱和对二氯苯溶液处理图一