葫芦脲[7]包合物为荧光探针测定青霉胺.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1813～1816DOI：10．3724／SP．J．1096．加10．01813以黄连素／葫芦脲[7]包合物为荧光探针测定青霉胺杨吉元申爱卓杜黎明+李常风吴昊常银霞(山西师范大学分析测试中心，临汾041004)摘要黄连素能和葫芦脲[7]生成1：1的主一客体稳定的包合物并使其荧光强度显著增强。当加入青霉胺后，黄连素／葫芦脲[7]所形成的包合物的荧光迅速猝灭，据此建立了一种简便灵敏的

2、检测青霉胺的新方法。青霉胺浓度在90—3000“g／L范围内与荧光猝灭值AF呈良好的线性关系，相关系数0．9996。检出限为30斗g／L。本方法的加标回收率为98．3％～103．6％，相对标准偏差为0．68％～0．95％。本方法成功用于药片中青霉胺的测定。关键词荧光探针；青霉胺；黄连素；葫芦脲[7]1引言葫芦脲[rt](Cucurbit[n]uril，n=4～12，CB[n])是超分子化学中继环糊精、冠醚及杯芳烃之后发展起来的一类新型高度对称的桶状系列大环化合物，由／'t个甘脲单元和2凡个亚甲基单元键合而成，具有疏水的内

3、部空腔及由环绕的羰基氧原子组成的端口。这就使得它能够通过疏水作用、氢键、离子偶极等键合作用键合多种有机分子，与极性和尺寸适合的有机客体可以形成包合物，而包合物的形成可以改变客体分子的光物理和光化学性质⋯。由于葫芦脲[7]粒(CB[7])良好的水溶性和包合能力而使之在分子识别方面得到广泛应用¨一J。青霉胺(Penicillamine，PenA)化学名称3，3-二甲基．(D)．半胱氨酸，是一种含有巯基的氨基酸，由于它对铜、汞、铅等重金属离子有很强的络合作用，可解由重金属离子引起的中毒；青霉胺还有明显的免疫抑制作用和抗炎作用，

4、对类风湿性关节炎及慢性活动肝炎等免疫性疾病均有良好的疗效。目前，青霉胺的分析方法有分光光度法¨j]、化学发光法№】、液相色谱法‘7’8】、毛细管电泳法[9,101和电化学法‘t1,12]等。青霉胺分子本身无荧光，文献[13，14]采用衍生化荧光光谱法测定了青霉胺。衍生化方法由于操作繁杂、灵敏度不高、重现陛差而在实际应用中很难推广，因此建立一种简便、快速、重现性好的测定青霉胺的高灵敏度荧光光谱新方法十分必要。盐酸黄连素(Berberinehydroehloride，BRH)是一种异喹啉类生物碱，具有抗菌、消炎作用。本课题组

5、已经对异喹啉药物与CB[n]之间的超分子包合作用进行了研究¨n”J，发现cB[5～8]均能与异喹啉药物生成l：l的主一客体包合物并使药物的荧光强度显著增强。本实验采用荧光光谱法研究了青霉胺与BRH在CB[7]空腔中的包合竞争反应，发现青霉胺能使BRH／CB[7]包合物的荧光发生剧烈猝灭，其荧光猝灭强度与青霉胺的浓度呈良好的线性关系。据此建立了一种以BRH／CB[7]包合物为探针的测定青霉胺的荧光光谱新方法。本方法操作简便，灵敏度高，选择性好，可用于药物制剂中青霉胺含量的测定。2实验部分2．1仪器与试剂F-4500型荧光分

6、光光度计(日本日立公司)，激发和发射狭缝均为5．0nm；PHS-3TC精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)。青霉胺标准品(中国药品生物制品鉴定所)，于105℃干燥至恒重，准确称取适量的青霉胺标准品，用二次蒸馏水配制成1．0×10。3mo]／L标准储备液，所需标准工作液用水稀2010-03．18收稿；2010416-25接受本文系教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No．20091404110001)资助项目·E—mail：lmd@dns．$】tdtlU．edu．cn分析化学第38卷释储备液而制得；葫芦脲[7]按文献报

7、道的方法制备和表征¨8

8、，用水配成1．2X10。mol／L的储备液；盐酸黄连素(中国药品生物制品鉴定所)，配制1．2X10。3mol／L盐酸黄连素溶液；青霉胺片剂(上海医药集团有限公司信谊制药总厂批号：090304)；其余试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。2．2实验方法于10mL比色管中分别加入1．0mL1．2X10。4mol／LCB[7]溶液和1．0mL1．2×10。4mol／L的BRH溶液，再加入1．0mL0．1mol／LHCI溶液，在(25．0±1)℃下振摇15rain，加人适量青霉胺溶液，再振摇15min，用

9、水定容至刻度，并用10mill石英池，以347am为激发波长，在495am处测定试剂空白荧光强度R及青霉胺加入到包合物溶液后的荧光强度F，计算荧光猝灭值AF(△F=R—F)，以△F对青霉胺浓度作工作曲线。3结果与讨论3．1CB[7]对BRI-I的荧光增敏作用研究了BRH及其包合物的光谱特性。由图1可见，BRH在水溶液