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《水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第5期2010年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry711~714DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00711水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷11*22王运王伟何治柯关洪亮1(华中农业大学理学院,武汉430070)2(武汉大学化学与分子科学学院,生物医学分析化学教育部重点实验室,武汉430072)摘要利用荧光光谱研究了三磷酸腺苷(ATP)与水溶性阳离子荧光
2、共轭聚合物的相互作用,发现加入ATP后,聚合物的荧光强度被显著猝灭,且猝灭程度与ATP的加入量成正比,据此建立了测定ATP的方法。荧光光谱的激发波长选择395nm,发射波长为521nm,激发狭缝宽度为10.0nm,发射狭缝宽度为10.0nm。在-8-5005mol/LTris-HCl缓冲溶液(pH=7.4)中,测定ATP的线性范围为8.010~1.010mol/L;检出限-8为2.010mol/L;回收率在93.6%~105.6%之间;相对标准偏差在2.2%~6.9%之间。本方法用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定,获得满意
3、结果。关键词荧光共轭聚合物;荧光光谱;三磷酸腺苷二钠1引言[1]三磷酸腺苷(ATP)是生物体中重要的能量物质,建立快速、简便监测ATP的方法对于深入研究[2][3]其功能具有重要意义。目前,测定ATP含量的方法主要有电化学分析法、生物发光法、高效液相色[4][5][6]谱法、毛细管区带电泳法及荧光光谱法等。但电化学分析法、生物发光法、毛细管区带电泳法和高效液相色谱法存在仪器昂贵、操作繁琐等缺点,而ATP检测试剂盒价格较高,试剂保存条件苛刻,不利于反复使用。虽然检测ATP的方法在不断改进,但灵敏度和选择性仍然难以满足实际需要。荧光光[7
4、][8][9]谱法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等特点,作为荧光探针的有小分子、聚合物及量子点等。水溶性荧光共轭聚合物作为一类新型荧光探针具有摩尔吸光系数大、荧光量子产率高等优点,还具有[10~13]分子导线的功能,能够实现荧光信号的放大,常用于生物大分子和生物小分子的检测等。本实验采用的水溶性阳离子荧光共轭聚合物(WCFP)属于一种聚噻吩衍生物。噻吩是五元环结构,符合休克尔规则,具有适中的能隙、较宽的光谱响应、良好的环境稳定性和热稳定性,是一类性能优[14,15]异的-电子系共轭光、电材料。利用WCFP与ATP相互作用的荧光光谱特
5、性,建立了以WCFP为荧光探针测定ATP的新方法,并将本方法应用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定,结果令人满意。本方法不仅简便、准确,试剂稳定、重现性好,而且具有反应时间短,试剂用量少,污染小等优点。2实验部分2.1仪器与试剂LS-55型荧光光谱仪(美国PerkinElmer公司),NicoletEvolution300型紫外-可见分光光度计(美国热电公司)。本实验所采用的WCFP属于一种聚噻吩衍生物,结构见图1插图。单体的相对分子量为285.57,按文献[16]方法合成。ATP(相对分子量为605.2,上海伯奥生物科技有限公
6、司);WCFP和ATP-5均配制成2.0010mol/L的储备液,其中WCFP浓度以单位计;其它试剂均为分析纯,所用纯水来自Aquapro纯水系统(中国重庆颐洋有限公司,18Mcm)。0.5mol/LTris-HCl缓冲液。2.2实验方法荧光光谱的激发波长为395nm,发射波长为521nm,激发和发射光谱宽度带为10.0nm。实验考察了缓冲溶液、pH值、离子强度、干扰离子等对ATP猝灭聚合物荧光光谱的影响。2009-09-18收稿;2009-12-15接受本文系国家自然科学基金(Nos.90717111,20621502)资助*E
7、-mai:lzhkhe@whu.edu.cn712分析化学第38卷3结果与讨论3.1ATP对WCFP荧光光谱的影响由加入ATP前后WCFP的荧光光谱(图1)可见,WCFP的最大发射波长均为521nm(曲线a)。随着ATP浓度的增加,WCFP的荧光强度逐步下降(曲线b~i),但其最大发射波长并未发生改变。3.2缓冲溶液和酸度的影响考察不同缓冲溶液对体系的影响,发现磷酸盐缓冲溶液对聚合物荧光猝灭较强,影响检测灵敏度;Tris-HCl缓冲溶液较好。当Tris-HCl缓冲溶液浓度从0.01mol/L增大到0.10mol/L时,荧光猝灭程度
8、逐渐增强;当Tris-HCl浓度达到0.04mol/L时,相对荧光猝灭程度变化趋于平缓。因此,选择0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液。图2为不同pH条件下ATP对WCFP
