离子排斥色谱紫外检测法测定奶粉中双氰胺含量.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第11期2013年11月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1734—1738DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30289i研究简报》-、离子排斥色谱紫外检测法测定奶粉中双氰胺含量陈梅兰潘广文戴琨曾雪灵叶明立(浙江树人大学生物与环境工程学院，杭州310015)(赛默飞世尔科技(中国)有限公司，上海201203)摘要建立了离子排斥色谱一紫外检测测定奶粉中双氰胺的方法，并用离子色谱一质谱进行验证。样品分别用水

2、(固液比为1：2)和乙腈(固液比为1：8)振摇后，离心分离过0．22m微膜，直接进离子排斥柱(IonPaeICE—AS1，250mmx9mm，5m)分离，采用3mmol／L甲酸一乙腈(3：2，wv>的混合液为流动相，流速为0．8mL／min，检测波长220nm，柱温为3O℃。结果表明，双氰胺的浓度在50g／L一0．3g／L范围内的相关系数r=0．9999，检出限(S／N>~3)为12．5ng／mL。添加浓度水平为500ng／g，0．5mg／g和3．6mg／g时，方法的回收率在97．6％～100％之间，相对标

3、准偏差为0．8％。关键词双氰胺；离子排斥色谱；紫外检测；奶粉1引言氮元素是植物健康生长的重要元素，然而过量的氮肥施用及家畜排泄物经土壤中的硝化细菌作用，会产生大量NO；，造成了氮肥的流失和水质的污染。双氰胺，化学式CHN，可通过抑制硝化细菌的活性，降低NH4转化成N0i，因而常被用作农田硝化细菌的抑制剂HJ。但在牧场中的过量使用，可能使双氰胺积聚在牧草中，而牧草中的纤维素却是奶牛日粮中的重要组成部分，最终会使双氰胺进入奶制品。双氰胺含氮量较高，有可能被添加到奶源中，以充作蛋白质的含量。直至目前我国还没有奶粉

4、及奶制品双氰胺的检测标准，也没有双氰胺的限量标准，但是双氰胺具有一定的毒性，人体摄人后对身体有一定的伤害。因此，建立一种快速、方便、低成本的奶粉及奶制品中双氰胺的检测方法很有必要。目前，双氰胺检测的相关报道有高效液相法(HPLC)’，高效液相色谱串联质谱(HPLC／MS／MS)法。由于双氰胺的极性较大，使用HPLC法测定时需在流动相中加人离子对试剂，加入离子对试剂的淋洗液不但平衡时间长，对色谱柱损伤大，且出峰时间受离子对试剂浓度影响。另外，HPLC／MS／MS仪器价格昂贵，导致分析成本较高，不适于大通量样品

5、的检测。离子排斥色谱(IEC)是以磺化的苯乙烯．二乙烯基苯阳离子交换树脂为固定相，弱酸或和有机溶剂结合为淋洗液的一种离子色谱模式¨，主要用于无机弱酸¨、有机酸和醇的分离。近年来离子排斥色谱已成功的应用于环境、食品和生化等领域。双氰胺的结构中有多个氮原子，氮原子上的孤对电子使双氰胺分子呈弱酸性，本研究采用IonpacICE—AS1离子排斥柱使双氰胺与三聚氰胺和尿素等分离，利用紫外检测，并成功应用于奶粉样品的测试。方法学考察和方法耐用性和色谱柱承受力实验结果良好。2实验部分2．1仪器与试剂ICS-2100离子色

6、谱仪；Ultimate3000RS紫外检测器；Ultimate．ThermoTSQVANTAGE(LC-MS)；GENPurePro超纯水仪；IonPac@ICE．AS1离子排斥柱(250mmx9mm，5txm)，以上仪器均由美国Ther．moFisher公司生产。双氰胺(上海安谱科学仪器有限公司，纯度98％，批号：YA38K200)；甲酸、乙腈(色谱纯，美国Thermofisher试剂公司)；水为MilliQ超纯水。2013-04-02收稿；2013-08—12接受本文系浙江省自然科学基金(No．Y510

7、0280)和浙江省分析测试基金(No．2011C37034)资助项目E—mail：rain—lake@163．con第11期陈梅兰等：离子排斥色谱紫外检测法测定奶粉中双氰胺含量2．2实验方法2．2．1标准溶液的配制称取双氰胺10mg，以水溶解并定容至10mL，得到1．0L储备液，用混合流动相稀释成不同质量浓度的标准工作液。另分别取尿素和三聚氰胺各5mg，以水溶解并定容至10mL，得到各为0．5L标准储备液，用于方法的专属性实验。色谱流动相：3mmol／L甲酸一乙腈(3：2，wv)。2．2．2样品前处理准确称

8、取奶粉约1．0g，置离心管中，加水2．0mL，振摇，加入乙腈8．0mL，振摇20min后，以10000r／min离心10min。取上清液，过0．22m滤膜，弃去2mL初滤液，取续滤液5mL作为样品溶液，供色谱分析。2．2．3色谱和质谱条件离子色谱条件：采用ICS2100离子色谱一U3000RS紫外检测器，IonPae@ICE—AS1离子排斥柱(250mm×9film，5m)，流动相为3mmol／L甲酸．乙腈(3：