碲化镉纳米晶标记抗荧蒽抗体及其荧光免疫分析.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2010年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry385～388DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．00385碲化镉纳米晶标记抗荧蒽抗体及其荧光免疫分析叶其炎庄惠生王琼娥张金艳周纯(东华大学环境科学与工程学院，上海201620)(上海交通大学环境科学与工程学院，上海200240)摘要以水热法合成的碲化镉(CdTe)纳米晶标记抗荧蒽抗体后，标记复合物的荧光强度增强，其分散性和稳定性良好。将此标记物用于直接竞争荧光免疫分析，测定了环境水样中荧蒽的含量。结果表明，在0

2、．1—1000tLg／L范围内有良好的线性关系；抑制率Ic。为12．4L，检出限IC：o为13．1ng／L。对水样进行加标回收实验，回收率在95．1％～111％之间；相对标准偏差小于9％。本方法准确可靠，结果满意，能够满足环境中微量环境激素类污染物的检测需要。关键词碲化镉；荧蒽；直接竞争；荧光免疫分析1引言荧蒽是一种含3个苯环的多环芳烃(PAHs)环境激素类有机污染物。煤、石油、天然气、有机高分子化合物和许多碳氢化合物等在不完全燃烧时，都能生成荧蒽等多环芳烃类物质，该类物质对人类和环境均能造成危害¨。美国环保局已将包括荧蒽在内的16种多环芳烃列为优先控制污染物，并作为

3、环境监测必检项目。因此，对荧蒽等多环芳烃类污染物的监测分析已成为环境监测的热点之一。目前，检测PAHs最常见的方法是气相色谱法和高效液相色谱法。但是，这些方法的前处理过程复杂且耗时，其检出限和线性范围有限，限制了该类方法的广泛应用。近年来，免疫分析技术被引入环境监测领域并显现出良好的应用前景I4J，它具有方便快捷、检测成本低、灵敏度高等优点。其中荧光标记免疫分析方法应用于环境激素有机污染物的检测已引起了广泛关注。纳米粒子具有的尺寸效应，使其可依据分子的大小而显示不同的光谱特征，能实现对不同物质的标记，而且光强度大、光稳定性高、谱线宽度窄J。以这些特殊材料为标记物，可显

4、著提高分析方法的灵敏度和分辨率，同时对生物大分子的活性影响较小¨⋯。以碲化镉(CdTe)纳米粒子替代一般荧光染料作为荧光标记探针，应用于环境激素荧蒽的检测分析还未见报道。本研究以自制CdTe纳米晶¨标记自制的荧蒽抗体，建立了直接竞争荧光免疫检测法(FIA)。用于检测环境中微量的环境激素类有机污染物荧蒽，结果可靠满意，为检测环境中多环芳烃类有机污染物提供了一种新的方法。2实验部分2．1仪器与试剂TU．1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；970CRT荧光分光光度计(上海分析仪器总厂)；Fix一800酶标仪(美国BIO—TEK公司)；96孑L荧光酶标板

5、(基因有限公司)。荧蒽人工抗原与抗体(自制)；功能性纳米晶CdTe(自制)n；萘、菲、荧蒽和蒽的标准品(百灵威公司)；卵清蛋白(OVA，上海华美生物制品公司)；吐温一20(上海化学试剂公司)；DM27mm透析袋(上海奔大生物科技公司)；水为超纯水；其它试剂均为国产分析纯。，2．2CdTe标记抗体取1．5mL功能性CdTe纳米晶于试管中，向其中加入5OixL0．10mol／L1一(3一二甲氨基丙基)一3一乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC—HC1)和50IxL0．10mol／LⅣ．羟基丁二酰亚胺(NHS)，室温放置15min后，加入2009-07-07收稿；2009-10—15

6、接受本文系国家自然科学基金(No．20677008)、教育部高等学校博士点创新基金(No．20060255004)、上海市重点学科基金(No．B604)和东华大学博士创新基金(No．BC200832)资助项目}E—mail：huishengzhuang@126．corn386分析化学第38卷2．0mL抗荧蒽抗体(1．4g／L)，于4℃反应48h，用磷酸盐缓冲溶液(PBS)透析完全后，于4cc冰箱保存。2．3直接竞争荧光免疫实验在方阵实验中，以空白吸收值最低，荧光强度较好，抗原抗体结合反应抑制率高，线性关系好的实验条件组合建立标准曲线。实验步骤如下：(1)包被：以0．0

7、5mol／L碳酸盐缓冲液(pH9．6)稀释包被抗原至工作浓度，100L／孔加至酶标板，4℃过夜；(2)封闭：将包被好的板取出，待其恢复至室温，用含0．05％()吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次。加入1％OVA封闭，200【／孔，37c【=温育0．5h；(3)加样：将封闭好的板取出，待其恢复至室温，PBST洗涤3次。每孔依次加入50经磷酸盐缓冲液(PBS)稀释的系列浓度的荧蒽标准溶液和50L经PBST稀释的CdTe标记抗体，对照孔加入50PBS和50LCdTe标记抗体，37qC温育1h；(4)测定：将温育好的板取出，PBST洗涤5次。用荧光酶