混合萃取剂-悬浮固化分散液相微萃取测定尿中的苯巯基尿酸.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2013年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry749—753DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．20940混合萃取剂-悬浮固化分散液相微萃取测定尿中的苯巯基尿酸王宇邹晓莉“张文滔曾红燕张龙飞(四川大学华西公共卫生学院，成都610041)(成都市龙泉驿区疾病预防控制中心，成都610100)摘要建立了混合萃取剂-悬浮固化分散液相微萃取联合高效液相色谱测定尿中苯巯基尿酸(s-phenflme~capturicacid，SP

2、MA)的方法。优化了微萃取的实验条件，取20mL尿样并调节至pH2．0，加入7．2g固体NaC1，并振荡溶解；以100十二醇一三氯甲烷(1．8：1，V／V)混合溶剂作为萃取剂，100p,L甲醇作为分散剂，振摇使萃取剂分散于样液中；离心使萃取剂悬浮于样品溶液表面，0℃冷冻至有机相凝固，转移凝固的萃取剂至EP管，室温下融化，离心后取上清液进样分析。苯巯基尿酸在0．025～1．25ms／L浓度范围内线性良好，方法检出限为0．019mg／L，日内精密度与日间精密度分别为2．2％～5．4％和2．5％～6．1％，将方法用于实际尿样的分析，

3、取得了较满意的结果，加标回收率在86．8％～99．9％之间。本方法简便快捷、适合尿样批量分析。关键词混合萃取剂；悬浮固化分散液相微萃取；高效液相色谱法；苯巯基尿酸；尿样1引言苯是一种中等毒性的有机化合物，主要对人体中枢神经和造血系统产生损害。国际癌症研究机构在1982年将苯确定为人类致癌物。苯接触的生物监测可以作为苯环境监测的补充。目前，尿中的反式一反式粘糠酸和苯巯基尿酸(S—phenylmercapturicacid，SPMA)是最为常用的生物监测指标。SPMA作为苯的特异性代谢产物，个体差异影响较小，在评价低浓度苯接触时，

4、尿中SPMA作为生物监测指标具有较为明显的优势¨。尿中SPMA的检测方法主要有液相色谱串联质谱法J、气相色谱串联质谱法J、酶联免疫吸附实验以及高效液相色谱法等。其中，酶联免疫吸附实验在人工抗原的制备和抗体纯化技术方面还有待完善J。亦有学者将气相色谱串联质谱引入SPMA的分析，但需经过衍生才能取得较好的灵敏度]。液相色谱串联质谱法灵敏准确，同时还能提供待测样品的结构信息，但所要求的仪器设备价格昂贵，在我国基层的卫生单位难以普及。作为国内最常配备的高效液相色谱一紫外检测系统同样可用于SPMA的检测，日本学者Inoue运用此法检测尿

5、中的SPMA，检出限能达到2Og／L。因此，若辅以简单重现和富集倍数良好的样品前处理技术，高效液相色谱．紫外检测方法可望作为基层职业苯接触生物监测筛查分析时的首选方法。传统的样品前处理技术，如液相萃取、固相萃取等，存在或操作繁琐耗时，或需大量有毒有机溶剂等缺点。为了实现样品前处理的环保高效，近年来发展了多种微萃取技术，如固相微萃取、液相微萃取等。2007年，Zanjani等在液相微萃取的基础上首次提出悬浮固化液相微萃取(SolidificationFloatingOrganicDropLiquidPhaseMicroextra

6、ction，SFO—LPME)技术，该方法操作简单、富集倍数高、有机溶剂易取出，在痕量分析领域具有较为广阔的应用前景。但是，能满足SFO．LPME模式要求的萃取剂往往具有较长的碳链，仅对一些亲脂性或者弱极性的分析物有较高的萃取率，在测定极性较大的物质时往往达不到理想的效果。本研究通过在常规萃取剂中加入合适比例的极性有机溶剂，引入极性更强的混合萃取剂，可达到既满足SFO—LPME萃取模式的要求，又能够有效地解决不同目标物萃取效率的目的，扩展了SFO．LPME的应用范围，并结合HPLC．uV完成了尿中SPMA的分析，取得了较为满意

7、的结果。2012-09—18收稿；2012—12-08接受E·mail：zouxll113@163．corn750分析化学第41卷2实验部分2．1仪器与试剂高效液相色谱仪(AKTApurifier，GEHeahhcare，美国GeneralElectric公司)，附紫外检测器。苯巯基尿酸标准品(纯度I>98％，东京化成工业株式会社)；甲醇、十二醇、三氯甲烷(色谱纯)；异丙醇、NaC1、KOH、浓HSO(95％一98％)、浓HC1(36％～38％)，冰乙酸。除特殊注明外，其余试剂均为分析纯。实验用水为超纯水(由Millipore

8、Synergy185超纯水机制得，18．2MQ·em)SPMA标准储备液：准确称取适量的SPMA标准品，以甲醇溶解并定容，配制成1．0g／LSPMA标准储备液，于4cC保存备用。2．2实验方法2．2．1空白尿样来源参照文献[8]，选择非职业苯接触及非吸烟学生的尿样作为实验所用