液相色谱-串联质谱法测定鸡组织中沃尼妙林残留.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第7期2010年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1031～1035DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01031液相色谱-串联质谱法测定鸡组织中沃尼妙林残留王蕊远立国贺利民朱理想罗显阳刘雅红(华南农业大学兽医学院，广州510642)摘要建立了鸡组织中沃尼妙林残留的液相色谱．电喷雾串联质谱(LC—ESI—MS／MS)检测方法。样品用乙腈提取后，过Strata—X—C固相萃取小柱净化。以乙腈．1％甲酸水溶液(35：65，V／V)为流动相，经LunaC色谱柱分离，采用电喷雾电离，多反应监测(

2、MRM)正离子模式对沃尼妙林进行定性与定量分析。采用基质匹配法，对鸡皮肤、肌肉、肾脏和肝脏中沃尼妙林的含量进行标准校正，在5(7．5)～500g／kg范围内线性良好(r>0．998)，在鸡肝脏中的检出限(LOD)及定量限(LOQ)分别为4．0和7．5g／kg；其它3种组织中的LOD及LOQ分别为2．5和5．0g／kg。在5(7．5)，50及500g／kg添加水平下，4中组织中沃尼妙林的平均回收率为78．5％一104．0％。日内相对标准偏差(RSD)为1．2％～9．8％，日问相对标准偏差为3．7％～13．2％。关键词沃尼妙林；鸡组织；残留；液相色谱一串联质谱1引言沃尼妙林(Valnemulin)

3、是新一代截短侧耳素(Pleuromutilin)半合成抗生素，为泰妙菌素同系物。由于其具有抗菌谱广、抗菌活性强、安全性高、耐药性低等特点正13益受到广泛关注。目前，欧洲、澳大利亚、美国、南美洲及亚洲的部分国家已批准使用沃尼妙林，主要用于防治畜禽支原体及肠道螺旋体感染。沃尼妙林在动物性食品中的残留可能危害人体健康，有必要建立动物性食品中沃尼妙林残留的检测方法。欧洲医药评价局(EMEA)规定，沃尼妙林在猪、兔组织中最高残留量(MRLs)为肌肉50g／、肾100g／kg、肝500g／kg。沃尼妙林为二萜类化合物，紫外吸收弱，其原药及制剂分析采用高效液相色谱(HPLC)远紫外检测Hj，而动物组织在远紫

4、外区杂质干扰多，紫外检测难以满足残留分析要求。目前，有关沃尼妙林分析检测的报道较少。瑞士Norvatis公司采用HPLC方法测定猪组织中沃尼妙林残留，检出限为22～90g／kg；Misako等采用在线固相萃取一液相色谱一串联质谱法测定了猪场废水中沃尼妙林等5种药物残留，方法灵敏度较高，但不适用于动物组织中沃尼妙林残留检测。本实验采用乙腈提取，固相萃取净化，建立了灵敏、可靠的鸡组织中沃尼妙林残留的高效液相色谱．串联质谱检测方法。2实验部分2．1仪器与试剂Agilent1200型液相色谱系统(美国安捷伦公司)；API4000电喷雾．串联四级杆质谱仪(美国应用生物系统公司)；LunaCl8色谱柱(1

5、50mm×2．0mm×5m，美国Phenomenex公司)；Strata．X．C混合型固相萃取(SPE)小柱(60mg，3mL，美国Phenomenex公司)；氮气吹干仪(美国Zymark公司)；半自动固相萃取仪(美国Waters公司)。沃尼妙林酒石酸盐对照品(含量98．7％，批号907一F67029，北京百灵威化学技术有限公司)；甲醇、甲酸、乙腈和乙酸铵(色谱纯，美国FisherScientic公司)；其它试剂均为分析纯，水为超纯水。2．2样品前处理准确称取2g鸡组织匀浆试样于15mL聚丙烯离心管中，加入5mL乙腈，匀浆30S，振荡30min，再超声10min，以7000r／min离心10m

6、in，转移上层清液。残余物用5mL乙腈重复提取一次，离心，合2009-10—14收稿；2010-01-28接受本文系“十一五”国家科技支撑计划课题(No．2006BAD31BO1)资助E-mail：gale@scau．edu．cn1032分析化学第38卷并两次提取液。用甲醇活化Strata—X—C固相萃取小柱，2％甲酸水溶液平衡。将乙腈提取液过柱，依次用2％甲酸水溶液、甲醇、正己烷各3mL淋洗小柱，抽干，最后用2mL5％氨甲醇洗脱，收集洗脱液，在50℃下氮气吹干。残渣用1mL乙腈一水溶液(50：50，)超声溶解，旋涡混匀后，过0．22m的针头滤膜，供检测。2．3基质匹配标准工作液2．3．1沃尼

7、妙林标准储备溶液准确称取适量酒石酸沃尼妙林对照品(相当于沃尼妙林50mg)于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得1．0g／L的标准储备液。临用前用乙腈一水溶液(50：50，v／v)配成0．1，0．2，0．5，1．0，2．0，5．0和10mg／L的沃尼妙林系列标准溶液。2．3．2基质匹配标准工作液4种空白鸡组织按2．2方法处理，收集氨甲醇洗脱液，分别加入100IzL上述沃尼妙林系列标准溶液，氮气吹