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1、2.1.8.6洗衣粉抗（抑）菌效果鉴定方法82丄&6.1原理木方法通过模拟洗衣机的洗衣过程，检测抗（抑）菌洗衣粉（剂）的抗菌作用。2.1.8.62试验器材（I）试验菌株大肠杆菌ATCC11229,金黄色匍萄球菌ATCC653&⑵培养基营养琼脂（琼脂含量为1.5%）营养琼脂A：在营养琼脂屮另加入1.5%的琼脂。TSA营养肉汤。（3）牛血清白蛋白（过滤除菌）⑷烷基酚聚氧乙烯瞇（Tergitol）⑸碳酸钠⑹柿淮硬水（7）非离了浸湿剂：见测试O制备部分⑻冲洗溶液（9）屮和剂（经屮和剂鉴定试验合格）（10）吐温80（过滤除菌）（II）去离了水或蒸镉水
2、灭菌（12）不锈钢转轴（由一条肓径0.16cm不锈钢丝制成，如图2・2）俯视图侧面图图2・2缠绕测试布条的不锈钢转轴（13）有金属螺盖的玻璃罐（容积为470ml,可高压灭菌，并可放入转轴的广口罐）,将罐口覆盖牛皮纸,加盖，于12FC灭菌25min备用。（14）转动速度为45t/min-60i/min的滚动摇床（15）可调恒温水浴箱（16）吸管（1ml,5ml,和10ml）（1刀培养皿（18）铺有滤纸的玻璃培养皿。（29）菌种保存管（20）细菌培养箱（21）涡流振荡器（22）细菌比浊仪（23）棉布（32支纱心n><32支纱/cm平织棉布）（2
3、4）别针、锻了、无菌手套、3mm7mm玻璃珠、秒表、载体布片25cm><3.75cm，见测试棉布准备。21.8.63实验准备⑴测试傅何饰恪%1^离了浸润剂的制备:取5g烷基酚聚氧乙烯陋，5g碳酸饷加入到1L去离了水中。%1洗涤液的制备：1龟非离了浸润剂，1.5g碳酸钠，加入到3L去离了水屮。将大约300g测试棉布加入3L洗涤溶液。加热煮沸lh。取出棉布在煮沸的去离了水屮清洗5mino然后放入凉去离了水屮5min0以去除残留的浸润剂。然后将棉布晾干。⑵测试棉布和转动支架的准备：取处理过的棉布剪成5cm宽，重量为15g±lg的布条将其一端插入固
4、定在测试转动支架的水平方向的外边然后在3条水平支架间以足够的张力缠绕12个整圈，将布条的另一端用不锈钢别针固定在前一圈布条上。最后以121°C压力蒸汽灭菌15min,备用。⑶细菌悬液的制备：取0.5ml营养肉汤冻干的菌种溶解接种于含10ml的营养肉汤的试管，于35°C±2°C培养24h。然后，振荡混合均匀。用1甲接种环在营养琼脂平板上划线，置于35°C±2°C培养24h。然后，从平板上挑取单个菌落种入菌种保藏管屮，上下摇动10次，吸弃多余液体，K-80°C冰箱保存。试验前，从菌种保藏管屮取出1粒带菌小颗粒放入营养琼脂斜面，晃动斜面。将斜面至
5、35°C培养24h。每天转种1次，连续传3代。第四天,用5m1PBS洗脱斜面上的菌苔,取0.5ml加入到含9.5mlPBS的试管中,混匀，取1ml〜2ml加入含有20ml营养琼脂B的细胞培养瓶中，晃动培养瓶使菌液覆盖整个琼脂表面。吸弃多余菌液，然示将培养瓶倒置平放在35°C培养箱屮，培养24h。用5m1PBS和3g灭菌玻璃珠洗脱细胞瓶屮的菌体，用PBS调整浓度至lxlOKcfu/ml〜5xl08cfu/ml,然后加入3%的牛血清白蛋白。（4）染菌载体的制备：每片载体接种20山菌悬液，放
6、叫培养川1•屮，加盖，于35°C±2°C在培养箱屮干燥
7、20mino（5）测试样品的制备：至少在实验开始前20min,将盛有265ml硬水的玻璃罐在水浴箱屮恒温至测试温度（25°C±1°C）O加入被测试样品混合溶解。2.1.&6.4试验步骤（1）将两片染菌载体放入转动支架的第6和7层布条Z间，将第3片放入第7和8层布条之间。⑵以无菌操作方式将转动单元（支架、布条和染均载体）放入含有测试产品的玻璃罐屮，加盖。（3）玻璃罐固定在摇床上，滚动旋转洗涤20min,取下玻璃罐。（4）以无菌操作方式，取出转动单元，取出3片染菌载体，放入到含有30ml中和剂（在测试抗菌产品的抗菌作用时，不加屮和剂，只加入含0
8、.5%吐温80的PBS）的试管屮，在振荡器屮混合10so然后振打200次,用PBS做10倍系列稀释,并选择适宜稀释度样液接种TSA平板。每个稀禅度接种两个平板。⑸对照组除用05%（V/V）的吐温80替代测试产品外，其它实验条件和步骤均与试验组相同。（6）菌数对照将3片染菌载体加入含有30ml05%吐温80的PBS试管屮，在振荡器振荡10s,然麻振打200次，用PBS做10倍系列稀释，并取适宜稀釋度样液1.0ml,以倾注法接种TSA平板，每个稀释度接种两个平桩（7）将试验组、对照组和菌数对照组平板倒置于35°C±2°C培养箱屮，培养48h±4
9、h,计数菌落数。⑻结果计算试验重复3次。记录并计算测试样品的细菌总数的对数值，求其平均值。21.8.65评价规定按2.1.743（7）的方法计算抑菌率,抑菌率达到50%可判为该抗
