小儿肺炎患者尿液的代谢组学初步研究.pdf

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1、第4_4卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第3期2016年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry451～455DOI110．11895／j．issn．0253-3820．150872d~JLB$炎患者尿液的代谢组学初步研究李静刘晓蕾赵旭李巍4戴雨霖越皓(长春中医药大学附属医院，长春130021)(长春中医药大学吉林省人参科学研究院，长春130117)(吉林大学第一医院肝胆胰内科，长春130021)(深圳市第三人民医院，深圳518112)摘要利用液相色谱一质谱联用法对小儿肺炎(Childhoo

2、dpneumonia，CP)患者和健康儿童(Healthycontro1)的尿液进行分析，发现A,JL肺炎患者尿液中的潜在标记物，为其发病机制及早期筛查提供科学依据。筛选1O例4,JL肺炎患者(age47．72+2．35months)及10例健康儿童(age46．65±1．97months)尿液样本，采用快速高分辨液相色谱四极杆一飞行时间质谱联用(RRLC-QTOF／MS)技术对其尿液代谢物进行分析，通过主成分分析方法(PCA)对两组代谢物进行分类，并发现潜在生物标记物。RRLC—QTOF／MS检测表明，CP组和HealthyContr

3、ol组尿液代谢物图谱能得到很好的区分，并鉴定了5种生物标记物，提示嘌呤代谢、氨基酸代谢可能在d,JL肺炎发生发展中有重要作用。关键词小儿肺炎；快速高分辨液相色谱质谱联用；尿酸；代谢组学1引言d,Jg肺炎(Childhoodpneumonia)是临床常见疾病，春冬季节更是高发，是我国婴幼儿死亡的三大因素之一，近年来发病率有明显上升趋势⋯。一般d,JL肺炎是通过临床症状热咳喘，肺部体征干湿性哕音，并结合胸片x线的检查来诊断，但人为因素常影响准确诊断。目前，临床上采用血常规、降钙素原、C反应蛋白诊断d,JL肺炎，用于鉴别细菌性肺炎、支原体肺炎

4、和病毒性肺炎及早期诊断，但是，对于儿童采血困难，血培养结果需要较长时间，以及临床有一部分病人患病初期在以上检测指标为阴性结果，以上几种因素制约了此类方法的应用。本研究建立一种创伤性小的d,JL肺炎的早期诊断方法。代谢组学(Metabonomics)’。是研究生物体系受刺激或扰动后，其代谢产物．内源性代谢物质种类、数量及其变化规律的科学，其研究对象主要是生物体液，如尿液、血液、唾液等71。代谢成分变化可以通过包括核磁共振、纳米复合材料、色谱一质谱联用等技术进行分析及应用，并通过计量学的手段对这些信息进行提取，认识人体代谢网络在疾病或药物作

5、用下的变化规律。本研究在前期工作基础上¨，采用快速高分辨液相色谱与四极杆．飞行时间串联质谱(RRLC—QTOF／MS)检Nd,JL肺炎患者尿液中代谢物的变化，通过主成分分析方法寻找潜在生物标记物，结合血液生化指标研究小儿肺炎的发生发展机制，为早期筛查和临床治疗提供依据。2实验部分2．1仪器与试剂Agilent1200快速分离液相色谱系统、Agilent6520Q—TOF质谱仪，配有电喷雾ESI离子源(美国AgilentTechnologies公司)；5804R型高速离心机(德国Eppendorf公司)。甲酸，乙腈(HPLC级，美国TED

6、IA试剂公司)。实验用超纯水通过MILLI．Q系统获得。2．2样本来源d,JL肺炎患者尿样和健康儿童尿样由长春中医药大学附属医院提供。研究经过长春中医药大学附属医院机构伦理委员会批准，所有患者都签署了知情同意书。患者通过血常规及血液C反应蛋白检查确诊为细菌型d,JL肺炎，清晨空腹采取尿样。健康对照组在清晨空腹采取尿样；两组样品3000r／rain2015—11-01收稿；2015．11-23接受本文系公益性行业(农业)专项(No．20130311106)资助}E-mail：crow—duncan@163．com：yuehao@sohu．

7、com452分析化学第44卷离心10rain，除去杂质，于-80％储存备用。主要指标筛选10例shJL肺炎患者(47．72±2．35月龄)及l0例健康儿童(46．65±1．97月龄)尿液样品进行分析。2．3样品处理采用离心沉降后四倍稀释法，将样品室温下溶解，在4~C以12000r／min离心5min，取50上清液，用水稀释至200IxL，涡旋，0．45Ixm滤膜过滤，待测。2．4LC-MS的代谢组学分析条件色谱条件：采用AgilentEclipsePlusC18色谱柱(150mm×2．1mm，3．5txm，Agilent公司)；柱温：3

8、5℃；流动相A：超纯水(0．1％甲酸)；流动相B：乙腈；梯度洗脱条件：0～5min，5％～20％B；5～10rain，20％～35％B；10～15min，35％～98％B；15～17min，98％～100％