猪传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定及防治.pdf

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1、资源育繁猪传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定及防治蔡国庆(江苏省徐州市泉山区畜牧兽医站221009)摘要：胸膜肺炎放线杆菌是猪传染性胸膜肺炎的致病菌．该1．2-3培养特性实验病是一种呼吸道疾病，影响着全球养猪业的发展。本研究采1．2．3．1细菌菌株的观察实验用多种培养基进行接种培养，从某猪场典型传染性胸膜肺炎把分离到的细菌菌株分别接种到普通琼脂培养基、SS培症状猪的肺脏和扁桃体中分离到了革兰氏阴性杆菌。通过该养基、麦康凯培养基、含有0．O1％V因子的血平板培养基、病原茵的培养特性、生物学特性和生化鉴定结果显示．该细巧克力培养基，10％C02培

2、养箱37℃培养24～48h，观察其培茵为猪胸膜肺炎放线杆菌。同时本研究也为今后对该病的预养特性。防控制与诊断治疗奠定了有效的基础。1．2-3．2NAD依赖性实验关键词：猪；胸膜肺炎放线杆茵；分离：鉴定将细菌分别接种含有马血清和NAD的营养肉汤和不含有马血清和NAD的营养肉汤中，37℃培养24—48h。猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacil—1．2-3_3卫星现象luspleuropneumoniae，APP)引起猪的一种急性热性呼吸道将分离到的细菌菌株接种在胰蛋白胨大豆肉汤琼脂平板疾病，主要表现为急性出血性和慢性坏

3、死性纤维素性肺炎。上，用金黄色葡萄球菌作滋养菌划一直线．在37℃条件下培急性死亡率高，慢性者常能耐过。该病自1957年发现以后养24～48h。就流行于世界各国，给各国的养殖业都产生了严重的影响，1．2．3．4CAMP实验给我国的养猪业也带来了严重的影响。金黄色葡萄球菌和可疑菌按垂直方向划线于血平板上．2011年4月。徐州市某猪场3月龄的育成猪开始发病，两种划线靠近但不要接触，37℃培养24～48h。如果可疑菌是然后立即出现大量死亡。临床主要表现为体温升高，拒绝采APP，则在金黄色葡萄球菌和APP划线交界处看到角形或食，呼吸困难，咳嗽，在

4、病猪的耳、鼻及四肢皮肤等处出现烟头状的溶血带发绀，呈现出蓝紫色，病猪迅速死亡。剖检病死猪，病死猪1．2．3．5生化实验的肺部发生肺炎，肺部颜色发深，质地坚硬，切面易碎，表取符合猪胸膜肺炎放线杆菌培养特性的疑似菌．接种木面附着一层纤维素性渗出物；胸腔表现为胸膜炎病变，胸膜糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇、靛基质、甲增厚，并有血色液体渗出。本试验在该猪场有典型症状的病基红、V—P、尿素酶、硫化氢生化试剂及微量生化鉴定管，猪病料中分离了胸膜肺炎放线杆菌，并以此为依据做药物敏感在一系列生化培养基中加入NAD试剂，接人待检菌，37℃培性实

5、验，提出合理的防治方案，对养殖户有一定的指导作用。养24～48h，观察结果。1材料与方法1．2．4血清学实验1I主要试验材料首先自制抗原，然后做琼脂扩散实验，制作琼脂平板，待检病料实验室无菌采集病死猪的肺、气管和鼻腔分泌然后打孔，在中间；fL~H抗原，在边缘孔加入各型抗体。将加物。APP1—12型标准抗体血清，微量发酵管，药敏纸片，金样的琼脂平板放在室温或37℃中扩散。同时制作标准组和阴黄色葡萄球菌。性对照组。36h后观察实验结果．并进行记录。如在琼脂平12方法板上m现沉淀线则判定为阳性，否则为阴性。1．2．1细菌的形态检查1．2．5药

6、物敏感性实验无菌采取病死猪的肺、鼻腔和气管内的分泌物制作成涂(1)药敏片红霉素、链霉素、青霉素、环丙沙星、氧氟片，然后进行染色镜检。沙星、庆大霉素、诺氟沙星、氟苯尼考、头孢噻呋、替米沙星。1．2-2分离培养(2)接种。将0．1ml的自制菌液接种于巧克力琼脂表面，无菌采取病死猪的肺、气管和鼻腔分泌物分别划线接种在室温下干燥5min。然后等平板稍微干燥后将药敏片放人其于巧克力琼脂培养基，37℃培养24h。对分离的细菌进行革中，药敏片之间的距离应保持在20mm左右。药敏片与培养兰氏染色．观察形态特征。挑取可疑菌落接种到含有10％牛皿边缘的距离

7、应保持在15mm左右。然后将制好的平皿放置血清和1001xg／mlNAD的马丁肉汤培养基中，37℃培养24～在37℃的电热恒温箱中，培养18-24h后，观察细菌的生长48h后，用含有10％牛血清和1001xg／mlNAD的马丁琼脂培养情况，是否产生抑菌环，并量取抑菌环的直径大小，来判定基分离纯化其敏感性。64口匾目匿口2014．11劫资源育繁2结果表1分离菌株生化实验结果2．1细茵的形态检查结果无菌采取病料，将采取的病料直接涂片．然后进行革兰氏染色，镜检，可在显微镜下观察到革兰阴性小杆菌，有荚尿素酶膜，无芽胞；瑞氏染色两极浓染。靛基质2

8、．2细茵培养特性检查结果皿R(1)分离株在普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基、SSV—P培养基上面不生长。在巧克力琼脂培养基和含有0．01％V因木糖子的血琼脂培养基上均能长出透明、细小、米粒大小的光滑蔗糖型。