猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2014．30(5537·论著·文章编号：1007—8738(2014)05—0537—05猪链球菌H因子结合蛋白截短体的表达、纯化及其结合人血清IgG的活性分析李雪琴，刘鹏，骈亚亚，郑玉玲，姜永强，，袁，霍春月。(安徽医科大学研究生学院，安徽合肥230032；军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071；。首都医科大学燕京医学院，北京101300)[摘要]目的构建带His标签的2型猪链球菌H因子结合蛋白(Fhb)截短表达片段Fhb—N(45-344aa)和Fhb．c(345-664aa)的重组

2、质粒，并在大肠杆菌中表达，获得高纯度的重组蛋白，鉴定其与人血清IgG(hIgG)结合的活性。方法以05ZYH33基因组为模板并设计引物扩增目的片段，构建His．Fhb．N和His—Fhb．C重组表达质粒，利用亲和层析纯化目的蛋白并用Westernblot法进行验证。蛋白G亲和层析柱从健康人血清中纯化人IgG(hlgG)，Westernblot法和生物膜干涉(BLI)鉴定和分析His—Fhb与hIsG结合的活性。结果成功构建了带His标签的原核表达质粒并获得了His．Fhb-N和His—Fhb-C截短表达蛋白，验证出Fhb特异性地与hlgG结合，且结合区域位于Fhb-N(45-344aa)。结论

3、Fhb能够结合hIgG，结合区域位于Fhb-N。[关键词]2型猪链球菌；Fhb；原核表达；人血清IgG[中图分类号]Q786；R392．11，$852．611[文献标志码]AExpression，purificationandhIgG-bindingactivityidentifcationoftruncatedStreptococcussuisfactorH-bindingproteinLIXueqin一，LIUPeng，PIANYaya，ZHENGYuling，JIANGYongqiang’，YUANYuan，HueChunyue。SchoolofGraduates，AnhuiMedica

4、lUniversity，Hefei230032；StateKeyLaboratoryofPathogenandBiosecurity，InstituteofMicrobiologyandEpidemiology，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100071；YanjingMedicalCollege，CapitalMedicalUniversity，Bering101300，China[Abstract]ObjectiveToconstructaprokaryoticexpressionvectoroftheHis-taggedtruncated

5、factorH-bindingprotein(Fhb)fragments，Fhb-N(aminoacids45-344aa)andFhb-C(aminoacids345-644aa)，ofStreptococcussuisserotype2，expressitinEcoliBL21(DE3)inordertoacquirehigh-purityrecombinantprotein，andfinallyidentifythebindingactivitywithhumanserumIgG(hlgG)．MethodsFhb-NgeneandFhb-Cgenewereamplifiedusingth

6、eprimersdesignedaccordingto05ZYH33genomesequencesandclonedintotheexpressionvectorpET28a(+)toconstructrecombinantplasmids．TheplasmidsweretransformedintoEcoliBL21(DE3)andinducedtoexpressbyIPTG．TherecombinantproteinswerepurifiedbynickelafinitychromatographyandidentifiedbyWesternblotting．ThehlgGwaspurif

7、iedfromhumanserumbyHiTrapproteinGHPcolumninaccordancewiththemanufacturer’sinstructions．Inaddition，thespecificbindingtohlgGwasidentifiedbyWesternblofingandbiolayerInterferometry(BLI)．ResultsTheprokaryo