下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno])2014。30(547l·论著·文章编号：1007—8738(2014)05～0471—05下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性周春辉一，杨帆，席文锦，魏铭，郑国旭，王微，杨安钢，张剑宁，，温伟红(海军总医院神经外科，北京100037；第四军医大学基础部免疫学教研室，西京医院泌尿外科，陕西西安710032；第二军医大学研究生院，上海200433)[摘要]目的在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达，观察对U87细胞生长

2、及放射敏感性的影响。方法用含有针对RNF2基因小发夹RNA(shRNA)的表达载体转染U87细胞，利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Westernblot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调，用MTT法检测细胞增殖，用annexinV-FITC／PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况；经x射线照射后，用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况。结果2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达。RNF2表达下调后，U87细胞的增殖受到显著抑制，s期细胞明显减

3、少(shRNA-NC：27．31±1．35；shRNF2．1：16．72±2．90；shRNF2-3：10．35±1．33)，G1期细胞显著增加(shRNA—NC：56．13±1．80；shRNF2．1：76．32±3．11；shRNF2-3：80．45±2．83)，同时出现细胞凋亡。经x线照射后，RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA．NC：20．88±0．64；shRNF2．1：39．69±0．57；shRNF2—3：47．82±0．45)。结论下调RNF2表达可明显抑制细胞生长，并增强U87细胞对放射的敏感性

4、。[关键词]RNF2；胶质瘤；RNA干扰；放射敏感性[中图分类号]R739．41，R392-33，Q253，R730．55[文献标志码]AEfectofRNF2knockdownonapoptosisandradiosensitivityingliomaU87cellsZHOUChunhui一，YANGFan，XIWenjin，WEIMing，ZHENGGuoxu，WANGWei，YANGAngang，ZHANGJianning，．WENWeihongDepartmentofNeurosurgery，NavyGenera

5、lHospital，Beijing100037；DepartmentofImmunology，SchoolofBasicMedicine，DepartmentofUrology，XijingHospital，Fou~hMilitaryMedicalUniversity，Xi’an710032；GraduateSchool，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，ChinalAbstractJobjectiveToinvestigatetheefectofRINGfin

6、gerprotein2(RNF2)knockdownonthebiologicalcharacteristicsandradiosensitivityingliomaU87cels．MethodsPlasmidscontainingshRNAtargetingRNF2weretransfectedintoU87cells．Real-timequantitativePCR(qRT-PCR)andWesternblottingwererespectivelyappliedtodetectthemRNAandproteinle

7、velofRNF2．MTTassaywasusedtodetectcellproliferation．CellcycleandapoptosisweremeasuredbyflowcytometrycombinedwithannexinV-FITC／PIstaininginthecontrolandRNF2knockdowncells．ApoptosiswasalsodetectedafterX-rayradiation．ResultsBothshRNAseficientlyinhibitedRNF2expression

8、inU87cells．CellproliferationwasobviouslydepressedinRN1：2knockdowncells．ThepercentageofcellsdecreasedinSphase(shRNA-NC：27．31±1．35；shRN1：2-1：16．72±2．90；shRNF2-3：