单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建人耳廓软骨.pdf

《单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建人耳廓软骨.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、2014年5月基础医学与临床Mav2014第34卷第5期Basic&ClinicalMedicineVo1．34No．5文章编号：1001-6325(2014)05．0583—06研究论文单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建人耳廓软骨康宁，刘霞，曹谊林，肖苒(中国医学科学院整形外科医院研究中心，北京100144)摘要：目的探讨单例先天性小耳残耳软骨细胞体外构建正常人大小耳廓形态组织工程软骨的可行性。方法分离40例小耳畸形患者残耳软骨细胞统计细胞提取率；MTT法检测细胞增殖能力、计算扩增效率；免疫荧光和PCR检测不同代数细胞的

2、软骨表型。分别应用3例患者各自的残耳软骨细胞培养至P一P代，藻酸盐凝胶包埋接种于正常人大小耳廓形态的聚羟基乙酸／聚乳酸支架，体外成软骨诱导动态培养10周后行组织学染色观察。结果耳软骨细胞提取率为(3．90±1．27)×10。／g；在增殖培养基中细胞增殖能力明显提高，至P代扩增(328．4±50．4)倍(P<0．05)；P代细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达显著减弱，至P代消失，I型胶原表达增强；体外培养10周，实验组形成了耳廓形态的类软骨组织，可见典型软骨陷窝，番红0、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性；对照组明显变形，未形成软骨结构。结

3、论单例先天性小耳残耳软骨细胞经体外扩增和动态诱导培养可在体外构建正常人大小耳廓软骨。关键词：先天性小耳畸形；残耳软骨细胞；耳廓形态软骨；组织工程中图分类号：R318文献标志码：AGenerationoffull--sizedandear·-shapedcartilagewithpassagedremnantearchondrocytesfrommicrotiaindividualKANGNing，LIUXia，CAOYi一1in，XIAORan(ResearchCenterofPlasticSurgeryHospital，

4、CAMS&PUMC，Beijing100144，China)Abstract：0bjectiveTotestthefeasibilityofinvitrogenerationofafull—sizedandear—shapedcartilagewithrem—nantearchondrocytesderivedfromindividualmicrotiapatient．MethodsTheinitialcellyieldofremnantearchondrocyteswasanalyzedfrom40casesofmicr

5、otia．ProliferationwastestedbyMTSandexpansioneficiencywascalculated．ThechondrocyticphenotypealteringaftercontinuouspassageswascharacterizedbyimmunofluorencestainingandPCR．P3～P4chondrocyteswereseededontothePGA／PLAscaffoldwiththeshapeandfullsizeofadulthumanear．Thecom

6、plexwasculturedwitharedifferentiationsystemcomposedofchondrogenicfactors，algi—nategel，andarotatingculturedevice．ResultsTheinitialcellyieldfromremnanteartissuewas(3．90±1．27)×10。／g．TheproliferativeabilityofremnantearchondrocytesfromP1～P4passageswasenhancedbyaddingbF

7、GF，andtheamplificationofthecellsexpandedtoP4couldreacharound(328．4±50．4)folds．However，theCOLI1andACANexpressionsgraduallydeclinedwithpassagesandbecamenegativeinP4chondrocyteswhereasCOLIexpressionshowedstronger．Theneo—cartilageintheexperimentalgroupmaintainedtheear

8、shapewelland收稿日期：2013—09—26修回日期：2013—11一O1基金项目：国家自然科学基金(31300801)；JL京市科技计划项日(13090800046609003)通信作者(correspondingauthor)：xiaoran@pumc．edu．con584基础医学与临床B