拟南芥种植方法.doc

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1、培养基上点种子：1.种子处理1.1种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。1.2点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。1.3春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。土培法：1.种种子前，要将营养土

2、用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强

3、度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；1）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；2）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；3）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。开花后的植物不能再用喷壶浇水

4、，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；4）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；5）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；6）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。注：温室202光照时间：9:00—19:00为短日照，有利于营养生长温室203光照时间：6:00—22:00为长日照，有利于生殖生长5.种子的收集和保存拟南芥种子处在长角果中，当逐渐成熟时，长角果由绿变黄，最后成褐色。当长角果变黄时，可以开始单个采集长角果，但此时种子中含有较多的生

5、长抑制剂。因而，当长角果变褐时及时采集，可得到成熟又易发芽的种子。收获的种子应立即脱粒、清洁、干燥。种子的收集：在桌面上铺几张干净的纸，戴上手套，将要收种的植物的花序用手将种子搓揉到纸上，再将纸上的大的杂质挑去后，将种子装到信封中，密封后将装有种子的信封置于干燥环境下，在室温条件下放置2-3周便可进行储藏。种子的贮存可根据贮存的目的不同，分为短期、中期、长期贮藏。一般短、中期贮藏是将种子贮存在4℃，而长期贮藏是保持在-20℃温度下。当取用长期贮藏的种子前，先将贮存种子的容器预热到室温，或者将其置于37℃水浴10min，以尽量使

6、冰害降至最低。