高效液相色谱的进样器和色谱.doc

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1、高效液相色谱的进样器和色谱进样器.A2G,l05N0B/W#b*[+u　　早期使用隔膜和停流进们器，装在色谱柱入口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求：密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLCfj样方式可分为：隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。1B  x0X0t;l(V!E  r　　1.隔膜进样。用微量注射器将样品注入专门设计的与色谱柱相连的进样头内，可把样品直接送到柱头填充床的中心，死体积几乎等于零，可以获得最佳的柱效，且价格便宜，操作方便。但不能在高压下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附样品产生

2、记忆效应，使进样重复性只能达到1～2%;加之能碉各种溶剂的橡皮不易找到，常规分析使用受到限制。,}%g;C6f3@/U3w　　2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保留时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中，效果较好。4p2K!a!J+c#v　　3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国RHEODYNE公司的7725和7725I型最常见)，其关键部件由圆形密封垫子(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积在存在，柱效率低于隔膜进样(约下降5～10%左右)，但耐高压(35～

3、40MPA)，进样量准确，重复性好(0.5%)，操作方便。(j-y"}  }9d/}3

4、/s3J(O-Z　　六通阀进样方式有部分装液法和完全装液法两种。①用部分装液法进样时，进样量应不大于定量环体积的50%(最多75%)，并要求每次进样体积准确、相同。此法进样的准确度和重复性决定于注器取样的熟练程度，而且易产生由进样引起的峰展宽。②用完全装液法进样时，进样量应不小于定量环体积的5～10倍9最少3倍)，这样才能完全置换定量环内和流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性。&a  u0Z)X2{#i.w　　六通阀使用和维护注意事项：①样品溶液进样前必须用0.45UM滤膜过滤，

5、以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力;转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样吕残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。-G6~;Q5

6、;B'[4E  s3Q　　4.自动进样。用于大量样品的常规分析。:s3f$~;s%S7L!m　　三、色谱柱8F  ?%g'A%]6z　　色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各

7、种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10UM等，柱效理论值可达5～16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10～30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。7^2O0`/C%U"h*d3t$_　　柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，不要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠

8、近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就*壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍料径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。:e#N5F:Q3Y0~&N　　1.柱的构造8K7M/J-Y5r0v　　色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70KG/CM2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效京，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同还有使用熔融硅或玻璃衬里的

9、，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2-20um(5-10um),取决于填料粒度,目的是防止填料漏出./N22Q,Z  O)S;f　　色谱柱按用途分为分析型和制备型两类,尺寸规格也不同:①常规分析柱(常量柱),内径2-5mm(常量4.6mm,国内又4mm和5mm),柱长10～30CM;②窄径柱(NARROWBORE，又称细管径柱、半微柱SEMI-MICROCOLUMN)，内径1～2MM，柱长10～20CM;③毛细管柱(又称微柱MICROCOLUMN)，内径0.2～