三角帆蚌DNA提取方法探讨.doc

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1、不同定方法对三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)基因组DNA提取效果比较1.1三角帆蚌简介三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)为淡水底栖贝类,属于软体动物门(Mollusca)、瓣鲍纲(Lamellibranchia)、真瓣鲍目(Eulamellibranchia)、蚌科(Unionidae),主要分布在5大湖区(鄱阳湖、洞庭湖、太湖、巢湖和洪泽湖)[,]o壳大而扁平，壳面黑色或棕褐色，厚而坚硬，长近20cm,后背缘向上伸出一帆状后翼，使蚌形呈三角状。后背脊有数条由结节突起组成的斜行粗肋。珍珠层厚，光泽强。钱合部发达，左壳有2枚侧齿，右壳有2枚拟主齿和

2、1枚侧齿。雌雄异体。三角帆蚌栖息于浅滩泥质底或浅水层屮，营埋栖生活，靠仲出斧足来活动。它是展被动摄食的动物，籍外界进入体内的水流所带来的食物为营养，其食性主耍以小型浮游生物为主，也滤食细小的动植物碎屑。每年4月〜5月，当天气晴暖，水温稳定在18。(2左右时，成熟卵经生殖孔排出附在外鲍瓣上，此时雄性成熟精子随水流从雌蚌的入水管进入外鲤瓣与卵子结合形成受精卵。受精卵经1个月发育成钩介幼山排出体外，遇到鱼类就利用足丝和钩齿抓住鱼体，在鱼身上营寄生生活，大约需经20d后可发育成幼蚌，从鱼体脱落沉入水底，营埋栖生活。三角帆胖是我国特有的河胖资源，又是育珠的好材料。用它育成的珍珠质量

3、好，80个〜120个蚌可育成无核珍珠500g,还可育有核珍珠、彩色珠、夜明珠等粒大晶莹夺H的名贵珍珠。肉可食；肉及壳粉可作家畜、家禽的饲料。珍珠及珍珠层粉具有泻热定惊、防腐生肌、明H解毒、止咳化痰等功能，是20多种屮成药的主要成分，可用于治疗多种疾病，并有嫩肤美白的特殊作用。用珍珠加工成的饰物，精致美观，高贵典雅，其价格昂贵，可供外贸出口。在我国100多种淡水蚌小，三角帆蚌是最适合养殖珍珠的蚌之一,所产珍珠光滑细腻、色泽明亮、晶莹剔透，为淡水珍珠上品。我国三角帆蚌养殖历史悠久，是淡水珍珠生产大国,自20世纪80年代末以来，淡水珍珠产量不断提高，2004年珍珠产出量约125

4、0t,占世界珍珠产量的90%以上〔2］。1.2DNA研究目的但是近年來，由于不规范的增养殖措施，如使用近源亲本、苗种培育不科学、忽视养殖病害等［3】，使得三角帆蚌种质退化、育珠期缩短、产珠质量下降。为防止三角帆蚌种质退化，提高三角帆蚌产珠性能，保证淡水珍珠的品质，利用分子生物学手段(如分子标记技术等)对三角帆娜的遗传多样性和群体亲缘关系进行分析，为选种、育种提供基础数据是非常必要和极其重要的。DNA提取是进行相关研究工作的基础，有效的DNA提取方法对三角帆蚌分子生物学研究具有重要参考价值。微一卫星DNA,或简单序列重复(SimpleSequenceRepeats,SSRs

5、),或简单序列长度多态(SimpleSequenceLengthPolymorphisms,SSLPs)是由1・6个碱基组成的短串联重复序列〔I。】。微卫星位点高度丰富，并且散布于整个真核生物基因组。微卫星DNA两端一般为较保守的单拷贝序列，故可以用来设计引物，然后经PCR扩增、电泳分析因重复次数不同而显示出不同基因型个体间的长度多态性和特界性。理想的分子标记应该具有大量可检测的变异位点、共显性遗传、符合孟徳尔遗传分离规律，并密集地分布在整个基因组屮。微卫星标记正好符合这些要求，因此它在群体遗传学、分子生态、家系鉴定和基因组作图等领域有广泛的应用，甚至在系统进化领域也有应

6、用前景。研究三角帆蚌的微卫星序列是研究其种群结构、遗传距离以及遗传连锁图谱的构建的基础。而在研究三角帆蚌微卫星的过程屮要大量采样，每个地方样本多，如果每个采集的地方都将三角帆蚌活体带回来就很麻烦，样本量太大，因而通过本试验的研究，探讨一种好的固定剂，这种固定剂固定三角帆蚌组织数天后其基因组DNA的质量任然较好。1.3国内外现状、发展趋势及研究的主攻方向从1972年DNA重组技术诞生以来，作为现代生物技术核心的基因工程技术得到飞速发展。其重要部分的DNA提取方法的研究也引起了研究人员的广泛关注，先后有许多国内外学者，用不同的材料开展了研究，范围涉及植物、动物以及微生物的各个

7、领域，甚至具体到某些器官屮DNA的最佳提取方法的建立，先后提出一些切实可行的方法，如常规的SDS法、CTAB法等。基因组DNA的提取是开展贝类分子水平相关研究的基础，H前国内外关于海洋贝类基因组DNA提取方法的报道较多［「〜⑷，但对淡水育珠蚌则较为少见〔①:提取方法基因组DNA的提取是开展贝类分子水平相关研究的基础，H前国内,限制了在一些渔场、研究所等城郊偏远地区的应用。本文以淡水屮的三角帆蚌，利用苯氯仿法，在低温的条件下提取高质量的DNA模板，为淡水育珠蚌乃至贝类的分子生物学研究提供一种简便快速、适应性好的DNA提取I古I定